[發明專利]一種基于組織芯片的蛋白-蛋白相關性的分析方法及應用

在審

• 申請號: 202010065566.8
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111239413A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 高學娟;劉秋雨;劉朗夏;張還添;劉小會;黃文思
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 黃瑩

本發明提供了一種基于組織芯片的蛋白?蛋白相關性的分析方法及應用。所述的分析方法通過先對組織芯片進行全局性預覽，分級進行觀察，在連號的組織芯片上同一個組織點相同視野中對比待研究的蛋白的表達情況及分析。本發明分析方法將待分析的蛋白的表達在相同組織的幾乎相同位置進行相關性比較分析，特異性和精細性得到了顯著的提高，更加貼近真實表達情況，由此更好地呈現和反映樣品如腫瘤組織中蛋白?蛋白表達的相關性，更好地輔助腫瘤基礎研究，對于蛋白?蛋白表達相關性研究、疾病科學研究等均具有重要意義和應用價值。

技術領域

本發明屬于生物檢測方法領域，特別涉及一種基于組織芯片的蛋白-蛋白相關性的分析方法及應用。

背景技術

蛋白-蛋白表達相關性的分析與鑒定對于腫瘤基礎研究中確定兩個蛋白的表達關系至關重要，尤其是利用臨床腫瘤組織進行的分析更為關鍵。然而，現有的分析方法難以滿足特異性和精細性。目前的分析方法一般將蛋白在腫瘤組織中的表達水平分為三個或四個等級，有些組織中這個蛋白的表達水平并不完全屬于三或四個等級中的一個，但最終也會勉強歸到一個近似的等級，出現分級不夠精細、不夠特異的問題。另一方面，由于同一個組織點不同視野蛋白的表達可能有明顯差異，現有的分析方法會導致一些蛋白評分偏差。

因此，研究開發特異性和精細性更好的方法，使分析與鑒定更加貼近真實表達情況，對于蛋白-蛋白表達相關性研究、疾病科學研究等均具有重要意義。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種基于組織芯片的蛋白-蛋白相關性的分析方法；本發明將待分析的不同蛋白在相同的視野下進行評分比較。

本發明的又一目的在于提供所述的基于組織芯片的蛋白-蛋白相關性的分析方法的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種基于組織芯片的蛋白-蛋白相關性的分析方法，包括如下步驟：

(1)在組織芯片上對其中一種待分析蛋白進行染色；

(2)通過完整的全局性預覽該組織芯片中該種待分析蛋白的表達水平，將所述的待分析蛋白的表達強度和表達百分比分別分為五個等級，例如從1到5，或者0到4；

(3)在特定視野下，將該種待分析蛋白的表達強度的分值乘以該種待分析蛋白的表達百分比的分值，得出該種待分析蛋白表達總分，也即染色強度；

(4)在與步驟(1)所述的組織芯片連號的其他組織芯片上的相同特定視野中，依次對其他待分析蛋白進行染色強度的觀察分析，重復步驟(1)～(3)；一般來說，一個組織芯片只對一種待分析蛋白進行染色分析，比如組織芯片I染A蛋白，組織芯片Ⅱ染B蛋白；

(5)將所得到的不同待分析蛋白的表達總分利用統計學中的相關性分析方法進行相關性分析。

步驟(1)中所述的組織芯片優選為腫瘤組織芯片。

步驟(1)中所述的染色的方法可以是常規的免疫組化染色方法或組織免疫熒光染色方法等等。

步驟(2)中所述的表達百分比的等級優選依次為0～20％，21～40％，41～60％，61～80％，80％以上這五個等級。

步驟(2)中所述的表達強度的等級優選依次為：完全沒表達為0；弱為1；中等為2；較強為3；很強為4。

步驟(2)所述的全局性預覽優選在低倍鏡下進行預覽，所述的低倍鏡的放大倍數可以是5倍左右。

步驟(3)中所述的特定視野可以選擇染色強度較為接近的多個，例如三個，可以均是表達相對高的，可以均是表達相對適中的，也可以是表達相對低的。

步驟(5)中所述的相關性分析方法根據數據類型、樣本量選擇Spearman或者Pearson相關系數分析。