[發明專利]一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝

在審

• 申請號: 202010065503.2
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111234009A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 張海夢;肖嵐;滕世超;張寶獻;張洛;陳世潔
• 申請（專利權）人: 華蘭生物工程重慶有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/18
• 代理公司: 重慶信航知識產權代理有限公司 50218
• 代理人: 李磊

1.一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，包括以下步驟：

S1-二次沉淀溶解、過濾：接取用低溫乙醇法生產的二次沉淀，用二次沉淀量體積5-10倍的2-8℃注射用水溶解二次沉淀，然后對二次沉淀溶解液進行過濾，得到二次沉淀過濾液；

S2-層析前參數調整：調整二次沉淀過濾液pH為5.6～6.00，蛋白濃度10～30g/L，電導率為0.15～1.90ms/cm，得到層析前溶液；

S3-層析：凝膠前平衡，利用強陰離子交換凝膠進行層析，層析前，先對凝膠進行沖洗平衡，平衡至凝膠的pH與層析前溶液的pH值差值為-0.20～0.20；制品層析，依據層析前溶液的蛋白濃度，按照0.5-1.5cm/min線性流速上樣，上樣至紫外起峰開始收集流穿液，上樣結束后頂出層析柱里的制品；凝膠后處理，用洗脫液將吸附于凝膠上的雜質沖洗下來，得到雜質溶液。

2.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，步驟S1中，用60LP濾堆與0.45+0.2μm濾芯串聯過濾二次沉淀溶解液。

3.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，步驟S2中，配制1.0mol/L醋酸溶液，將1.0mol/L醋酸溶液以300～400ml/min加入二次沉淀過濾液中，調整二次沉淀過濾液pH為5.6～6.00。

4.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，步驟S2中，用低溫注射用水或pH為5.6～6.00的0.0025mol/L醋酸鈉/醋酸緩沖液調整二次沉淀過濾液的蛋白濃度為10～30g/L，電導率為0.15～1.90ms/cm。

5.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，在步驟S3中，凝膠前平衡時，按1.5～3.0cm/min的線性流速分別用0.5mol/L氫氧化鈉溶液走3～5倍柱床體積、平衡液1走3～5倍柱床體積、平衡液2走3～5倍柱床體積，平衡pH至5.80±0.20。

6.根據權利要求5所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，所述平衡液1為PH值為5.6-6.00的0.025mol/L的醋酸鈉/醋酸緩沖液；所述平衡液2為PH值為5.6-6.00的0.0025mol/L的醋酸鈉/醋酸緩沖液。

7.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，在步驟S3中，制品層析時，上樣結束后用PH值為5.6-6.00的0.0025mol/L的醋酸鈉/醋酸緩沖液頂出層析柱里的制品。

8.根據權利要求1所述的一種去除特異性人免疫球蛋白中IgA和IgM的層析工藝，其特征在于，在步驟S3中，凝膠后處理時，按1.0～3.0cm/min的線性流速分別走洗脫液3～5倍柱床體積、凝膠CIP液3～5柱床體積、凝膠封存液3～5柱床體積。