[發明專利]一種具有廣譜性識別N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202010064501.1
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111172117B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 鄧國華;崔鵬飛;陳化蘭;施建忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心)
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/16;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發明公開了一種具有廣譜性識別N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白的單克隆抗體及其應用。所述的單克隆抗體由保藏編號為CGMCC No.18899的雜交瘤細胞株1C4分泌產生。本發明公開的單克隆抗體1C4除了可以與H7N9反應外，還可以與H1N9和H11N9等位于不同進化分支的N9亞型禽流感病毒發生特異性反應，具有良好的廣譜性，同時對N9血清也具有良好的阻斷效果。本發明還公開了利用單克隆抗體1C4制備的用于檢測N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白抗體的阻斷ELISA檢測試劑盒，該試劑盒具有良好的特異性和敏感性，適用于大規模臨床血清樣品中N9抗體的檢測，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種可分泌具有廣譜性識別N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，同時涉及該雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體及其應用。本發明屬于生物技術領域。

背景技術

禽流感(AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽類急性傳染病，被世界動物衛生組織列為A類烈性傳染病。禽流感病毒(AIV)是一種單股負鏈分節段的RNA病毒，亞型眾多，可根據其表面糖蛋白血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)的抗原差異分為16種不同的HA亞型和9種不同的NA亞型，此外，還在蝙蝠體內分離到H17N10和H18N11亞型流感病毒。

NA是由片段6編碼的一種II型糖蛋白，NA蛋白在結構上形成一個異源四聚體，每個NA蛋白單體都是由一段氨基端短的胞質區，疏水的跨膜區，莖部區和球狀的頭部區組成。NA蛋白具有神經氨酸酶活性，在病毒感染的后期，可以切割宿主細胞表面以及新生病毒粒子表面的唾液酸，進而促進新形成病毒粒子的釋放和擴散，阻止新生病毒粒子在細胞表面的聚積。

H7N9亞型禽流感病毒不僅危害家禽生產，而且還對人類健康構成嚴重威脅。2013年3月，我國上海報道全球第一例人感染H7N9病例，隨后該疫情迅速蔓延至全國各地，截止至2019年5月10日，已有1568人感染H7N9，其中615人死亡。因此，加強對N9亞型禽流感病毒的監測具有重要的公共衛生學意義。目前，國家流感中心的周劍芳研究員已成功研制出能夠識別H7N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白的單克隆抗體，然而，國家禽流感參考實驗室監測數據顯示，當前國內流行的N9亞型禽流感病毒除了H7N9外，還包括H1N9和H11N9等其他亞型組合，并且不同病毒之間的N9基因進化關系差異顯著，給N9亞型禽流感病毒的監測增加了難度，因此，急需開發一種能夠廣譜性識別不同類型N9亞型禽流感病毒的診斷方法。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種能夠穩定分泌具有廣譜性識別N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

本發明的目的之二是提供一種由上述雜交瘤細胞株所分泌的具有廣譜性識別N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白的單克隆抗體。

本發明的目的之三是將上述單克隆抗體應用于N9亞型禽流感的診斷和治療。

本發明達到上述目的是通過以下技術方案實現的：

本發明首先選取3株位于不同進化分支的N9亞型禽流感病毒，將滅活后病毒依次間隔14天免疫6周齡BALB/c雌性小鼠，取免疫后小鼠脾臟與SP2/0細胞融合。利用間接免疫熒光方法篩選到1株能夠穩定分泌具有廣譜性抗N9亞型禽流感病毒神經氨酸酶蛋白的單克隆抗體雜交瘤細胞株，命名為1C4，分類命名為雜交瘤細胞，該細胞株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No.18899，保藏時間為2019年12月4日。