[發明專利]文冠果的一種組織培養繁殖方法

有效

• 申請號: 202010064052.0
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111165354B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 閆曉芳;張潔;汪杏芬;周旭東;林國祚
• 申請（專利權）人: 上海培林生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種誘導文冠果生根的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1) 采集文冠果當年生半木質化枝條作為外植體，將外植體先以洗潔精溶液漂洗，再用酒精溶液消毒，之后采用2～3次的次氯酸鈉溶液消毒；以啟動培養基培養，暗培養2～6天后進行光培養，誘導獲得不定芽；所述啟動培養基包括：MS培養基，6-芐基腺嘌呤0.1～1毫克/升、吲哚-3-丁酸0.01～0.5毫克/升和山梨酸鉀10～50毫克/升；

(2) 從(1)誘導的不定芽接種到擴繁培養基中培養，誘導產生叢生芽；所述擴繁培養基包括：改良MS培養基，6-芐基腺嘌呤0.1～1毫克/升、萘乙酸0.01～1毫克/升和噻二唑苯基脲0.01～0.5毫克/升；所述改良MS培養基為減少200mg/L硝酸銨的MS培養基；

(3) 將(2)獲得的叢生芽接種到壯苗培養基中，獲得健壯芽苗；其中，所述壯苗培養基包括：改良MS培養基，6-芐基腺嘌呤0.05～2毫克/升、萘乙酸0.01～0.5毫克/升和維生素B11～10毫克/升；

(4) 從(3)的芽叢中切割單株，以生根培養基培養，獲得生根的試管苗；其中，所述生根培養基包括：1/2 MS培養基，吲哚-3-丁酸0.1～1毫克/升和維生素C 30～300毫克/升；

所述培養基中還包括：蔗糖20～40克/升，瓊脂4～8克/升。

2.一種培育文冠果的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a) 以權利要求1的方法誘導，獲得生根的試管苗；

(b) 將(a)的生根的試管苗移栽到育苗基質中馴化、煉苗；

(c) 將(b)的煉苗后的苗移栽至自然環境中。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)之前，還包括對文冠果外植體進行消毒。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，采用3次的次氯酸鈉溶液消毒，包括依次以1%、0.5%、0.1%次氯酸鈉消毒。

5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，啟動培養基培養的時間為12～25天。

6. 如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述啟動培養基包括：6-芐基腺嘌呤0.1～0.5毫克/升；吲哚-3-丁酸0.05～0.4毫克/升；山梨酸鉀20～40毫克/升。

7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的擴繁培養基包括：6-芐基腺嘌呤0.1～0.5毫克/升；萘乙酸0.05～0.3毫克/升；噻二唑苯基脲0.03～0.2毫克/升；或

擴繁培養基培養的時間為18～28天。

8. 如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述壯苗培養基包括：6-芐基腺嘌呤0.06～0.4毫克/升；萘乙酸0.03～0.3毫克/升；維生素B1 2～8毫克/升；或

以壯苗培養基培養的時間為8～25天。

9. 如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，以生根培養基培養后，黑暗培養2～6天后，進行光培養；或

步驟(4)中，生根培養基培養的時間為20～35天；或

步驟(4)中，所述生根培養基包括：吲哚-3-丁酸0.1～0.6毫克/升；維生素C 40～120毫克/升。

10. 如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，所述的育苗基質包括泥炭土、珍珠巖、蛭石或其組合；或

過渡培養時，溫度20～25℃，相對濕度80～85%；或

過渡培養的時間為25～35天，之后進行煉苗。

11.如權利要求2所述的方法，其特征在于，煉苗時的相對濕度為80%以下。

12.如權利要求2所述的方法，其特征在于，煉苗至苗高30厘米后移栽至自然環境。