[發明專利]一種卵形鯧鲹性別特異性分子標記引物、鑒別方法及其應用

有效

• 申請號: 202010063996.6
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111088370B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 張殿昌;郭梁;楊靜文;郭華陽;劉寶鎖;朱克誠;張楠;楊權
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

1.一種卵形鯧鲹性別特異性分子標記引物，其特征是所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的堿基序列如SEQ ID NO ：1所示，所述反向引物的堿基序列如SEQ ID NO ：2所示。

2.一種卵形鯧鲹雌雄鑒別的方法，其特征是包括以下步驟：提取待測卵形鯧鲹的基因組DNA，采用權利要求1中的引物進行PCR擴增，將擴增產物進行毛細管電泳檢測特異性分子標記，所述特異性分子標記為SEQ ID NO ：3所示第2000-2024位之間存在10bp的插入或缺失變異，插入型序列為AAACTTTATTCAACTTT，缺失型序列為AAACTTT，其中雌性為插入型純合，雄性為缺失型純合或缺失/插入雜合。

3.根據權利要求2所述的卵形鯧鲹雌雄鑒別的方法，其特征是：PCR擴增時采用的PCR反應體系為：20 ng/μL DNA模板1.0 μL，10×Taq buffer，Mg²⁺ free，2.5 μL，濃度2.5mMdNTPs 2.0 μL，濃度25mM MgCl₂ 1.5 μL，10mM 正向引物和反向引物各0.5 μL，5 U/μL Taq0.1μL，ddH₂O補齊25 .0 μL。

4.根據權利要求2所述的卵形鯧鲹雌雄鑒別的方法，其特征是：PCR擴增時采用的PCR反應程序為：94℃預變性5 min，94℃變性10 sec，55℃退火40 sec，72℃延伸45 sec，循環35次，72℃延伸10 min。

5.權利要求1所述的引物在制備用于鑒別卵形鯧鲹雌雄的試劑盒或生物制劑中的應用。