[發明專利]一種利用古菌分子標記OTU127快速檢測城市搬遷地土壤有效錳含量的方法

有效

• 申請號: 202010063263.2
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN113136386B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 張浪;韓繼剛;張維維;金荷仙
• 申請（專利權）人: 上海市園林科學規劃研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發明公開了一種利用古菌分子標記OTU127快速檢測城市搬遷地土壤有效錳含量的方法。本發明提供了一種DNA分子(探針)，如序列表的序列1所示。本發明還保護所述探針在檢測或輔助檢測土壤有效錳含量中的應用。本發明還保護所述探針在比較不同地塊的土壤有效錳含量中的應用。采用本發明提供的方法檢測土壤有效錳含量或比較不同地塊的土壤有效錳含量，具有如下優點：樣品需求量小，無需前處理，所需時間短，人力成本低，可以實現對大批量樣品的快速自動化檢測。本發明對于土壤樣品的測評具有重要應用推廣價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種利用古菌分子標記OTU127快速檢測城市搬遷地土壤有效錳含量的方法。

背景技術

隨著城市化的快速發展，目前我國城市，尤其是特大城市，已進入“城市再開發”為主導的城市發展階段，城市搬遷地大量出現，在東部沿海經濟發達地區的城市尤其明顯。以上海為例，建成區范圍內80％-90％的建設綠地都是在城中村拆遷、舊工廠搬遷等地塊上開展的，對其土壤質量進行科學客觀的監測和評價，是進行城市搬遷地生態修復和園林綠化的前提和重要參考依據。

目前對城市搬遷地土壤質量指標的檢測主要是沿用傳統的理化檢測方法，樣品需求量大，樣品前處理過程復雜、周期長，尤其所需要的人力資源成本較高，難以實現對大批量樣品的快速檢測。土壤微生物對土壤環境的變化具有綜合性、敏感性和功能性的特點，探索通過檢測特定微生物類群的豐度來實現對城市搬遷地土壤質量指標的快速和自動化檢測技術具有重要的現實意義。

錳是生物體的必需微量元素，對維持生物體正常的新陳代謝起著關鍵的作用；但是錳過量會對生物體生命代謝活動造成極大損害。土壤中的錳以多種形態存在，有效態錳包括水溶性錳、交換態錳和易還原態錳3類，有效態錳能夠很好地反映土壤的供錳強度。土壤錳含量主要受土壤母質的影響，其有效態受土壤pH值和氧化還原電位的影響。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用古菌分子標記OTU127快速檢測城市搬遷地土壤有效錳含量的方法。

本發明提供了一種DNA分子(探針)，如序列表的序列1所示。

本發明具體提供了一種Taqman探針，其核苷酸序列如序列表的序列1所示。所述Taqman探針的5’末端具有熒光基團，3’末端具有熒光淬滅基團。所述熒光基團具體可為FAM。所述熒光淬滅基團具體可為TAMRA。

本發明還保護所述DNA分子或所述Taqman探針在檢測或輔助檢測土壤有效錳含量中的應用。

本發明還保護所述DNA分子或所述Taqman探針在比較不同地塊的土壤有效錳含量中的應用。

本發明還保護引物探針組，由特異引物對和特異探針組成；所述特異引物對由序列表的序列4所示的引物524F-10-ext和序列表的序列5所示的引物Arch958R-mod組成；所述特異探針的核苷酸序列如序列表的序列1所示。所述特異探針為Taqman探針。所述Taqman探針的5’末端具有熒光基團，3’末端具有熒光淬滅基團。所述熒光基團具體可為FAM。所述熒光淬滅基團具體可為TAMRA。

本發明還保護所述引物探針組在檢測或輔助檢測土壤有效錳含量中的應用。

本發明還保護所述引物探針組在比較不同地塊的土壤有效錳含量中的應用。

本發明還保護一種試劑盒，包括所述引物探針組。

所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)：

(a)檢測或輔助檢測土壤有效錳含量；

(b)比較不同地塊的土壤有效錳含量。

所述試劑盒還包括記載有如下方法甲或方法乙的載體。

本發明還保護一種檢測土壤有效錳含量的方法(方法甲)，包括如下步驟：