[發(fā)明專利]一種以莖段為外植體的齒葉冬青組培快繁方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010062569.6
• 申請(qǐng)日: 2020-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN111134022B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊玉潔;郝明灼;鄒義萍;耿芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長江大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 江慧

本發(fā)明公開了一種以莖段為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，包括：步驟1、采集齒葉冬青枝條，清洗消毒；步驟2、將齒葉冬青枝條截成帶芽莖段，接種于增殖伸長培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和伸長培養(yǎng)；所述增殖伸長培養(yǎng)基為添加2.28～9.12μM ZT的MS培養(yǎng)基；步驟3、轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)得到帶根小苗，所述生根培養(yǎng)基為添加有2.07～8.29μM IBA的1/2MS培養(yǎng)基；步驟4、將所得帶根小苗移栽至栽培基質(zhì)中培養(yǎng)；本發(fā)明以齒葉冬青幼苗莖段為外植體，通過植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)幼苗莖段的增殖培養(yǎng)和對(duì)不定根的誘導(dǎo)研究，成功獲得無菌苗微繁成苗快繁體系，齒葉冬青組培苗生根率高達(dá)90％以上，移栽存活率高達(dá)90％左右。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組培技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種以莖段為外植體的齒葉冬青組培快繁方法。

背景技術(shù)

齒葉冬青是多枝常綠灌木，高可達(dá)5米；葉片革質(zhì)，倒卵形，橢圓形或長圓狀橢圓形，雄花1-7朵排成聚傘花序，花4基數(shù)，白色；花萼盤狀，花瓣4，闊橢圓形，花冠直徑約6毫米，花瓣卵形，子房卵球形，果球形，成熟后黑色；內(nèi)果皮革質(zhì)。花期5-6月，果期8-10月。生于海拔700-2100米的丘陵，山地雜木林或灌木叢中。分布于中國、日本和朝鮮。常栽培作庭園觀賞樹種，歐美各地亦有栽培。齒葉冬青果實(shí)屬植物種子，發(fā)芽十分困難，由于堅(jiān)硬的種皮和未成熟合子胚的雙重休眠，使其具有隔年發(fā)芽的特性。齒葉冬青常規(guī)育種需要2-3年才能獲得幼苗。

為了克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性，獲得遠(yuǎn)緣雜交品種，打破種子休眠，縮短其育種周期，縮短齒葉冬青的應(yīng)用年限，節(jié)省勞力和財(cái)力，組織培養(yǎng)法是快速獲得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前組織培養(yǎng)法的齒葉冬青組培苗生根率低，移栽存活率低，限制了其大規(guī)模的推廣和繁殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，提供了一種以莖段為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，齒葉冬青組培苗生根率高達(dá)90％以上，移栽存活率高達(dá)90％左右，將齒葉冬青的萌發(fā)時(shí)間由常規(guī)育種的2-3年縮短為15-17周。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明的目的在于提供一種以莖段為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，所述方法包括：

步驟1、采集齒葉冬青枝條，清洗消毒；

步驟2、將齒葉冬青枝條截成帶芽莖段，接種于增殖伸長培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和伸長培養(yǎng)；所述增殖伸長培養(yǎng)基為添加2.28～9.12μM ZT的MS培養(yǎng)基；

步驟3、轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)得到帶根小苗，所述生根培養(yǎng)基為添加有2.07～8.29μM IBA的1/2MS培養(yǎng)基；

步驟4、將所得帶根小苗移栽至栽培基質(zhì)中培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述步驟1中清洗消毒的具體步驟為：選擇冬青枝條用洗衣粉清洗10～30min，再用流水沖洗10～30min，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)上用無菌水潤洗；用75％酒精浸泡5～20min，再用8％次氯酸鈉浸泡15～30min，最后用無菌水沖洗5～6次，待用。

優(yōu)選地，所述步驟2中的帶芽莖的長度為0.5～1.5cm。

優(yōu)選地，所述步驟2所用的增殖伸長培養(yǎng)基為添加9.12μM ZT的MS培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述步驟2中增殖和伸長培養(yǎng)的時(shí)間為50～60天。

優(yōu)選地，所述步驟3中所述生根培養(yǎng)基為添加有4.14μM IBA的1/2MS培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述步驟3中生根誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間為50～60天。

優(yōu)選地，所述步驟4中移栽至栽培基質(zhì)中置于溫室苗床上噴霧系統(tǒng)下生長。

本發(fā)明具有以下有益效果：