[發(fā)明專利]一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010062568.1
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111134021A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊玉潔;郝明灼;鄒義萍;耿芳
• 申請（專利權(quán)）人: 長江大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 江慧

本發(fā)明公開了一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，所述方法包括：步驟1、采集齒葉冬青果實，清洗消毒；步驟2、剝出幼胚，接種于基本培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)12～16天；步驟3、當(dāng)幼胚萌發(fā)后轉(zhuǎn)移至光照條件下培養(yǎng)26～30天；步驟4、清洗幼苗并移栽至栽培基質(zhì)中培養(yǎng)；以齒葉冬青未成熟合子胚為外植體，建立了齒葉冬青植物組織快速繁殖體系，將齒葉冬青的萌發(fā)時間由常規(guī)育種的2?3年縮短為5?7周，且齒葉冬青組培苗發(fā)芽率高達100％，移栽存活率高達90％左右。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組培技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法。

背景技術(shù)

齒葉冬青是多枝常綠灌木，高可達5米；葉片革質(zhì)，倒卵形，橢圓形或長圓狀橢圓形，雄花1-7朵排成聚傘花序，花4基數(shù)，白色；花萼盤狀，花瓣4，闊橢圓形，花冠直徑約6毫米，花瓣卵形，子房卵球形，果球形，成熟后黑色；內(nèi)果皮革質(zhì)。花期5-6月，果期8-10月。生于海拔700-2100米的丘陵，山地雜木林或灌木叢中。分布于中國、日本和朝鮮。常栽培作庭園觀賞樹種，歐美各地亦有栽培。齒葉冬青果實屬植物種子，發(fā)芽十分困難，由于堅硬的種皮和未成熟合子胚的雙重休眠，使其具有隔年發(fā)芽的特性。齒葉冬青常規(guī)育種需要2-3年才能獲得幼苗。

為了克服遠緣雜交不親和性，獲得遠緣雜交品種，打破種子休眠，縮短其育種周期，縮短齒葉冬青的應(yīng)用年限，節(jié)省勞力和財力，組織培養(yǎng)法是快速獲得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前組織培養(yǎng)法的齒葉冬青組培苗發(fā)芽率低，移栽存活率低，限制了其大規(guī)模的推廣和繁殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，提供了一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，齒葉冬青組培苗發(fā)芽率高達100％，移栽存活率高達90％左右，將齒葉冬青的萌發(fā)時間由常規(guī)育種的2-3年縮短為5-7周。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

本發(fā)明的目的在于提供一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，所述方法包括：

步驟1、采集齒葉冬青果實，清洗消毒；

步驟2、剝出幼胚，接種于基本培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)12～16天；

步驟3、當(dāng)幼胚萌發(fā)后轉(zhuǎn)移至光照條件下培養(yǎng)26～30天；

步驟4、清洗幼苗并移栽至栽培基質(zhì)中培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述步驟1中齒葉冬青果實為8月份采集呈綠色的齒葉冬青果實。

優(yōu)選地，所述步驟1中清洗消毒的具體步驟為：將齒葉冬青果實用流水沖洗后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺用無菌水潤洗；表面消毒先用75％的酒精浸泡3～15min，再用8％次氯酸鈉浸泡10～30min，最后用無菌水沖洗5～6次，放入無菌水中待用。

優(yōu)選地，所述步驟2所用的基本培養(yǎng)基包括WPM培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、1/4MS培養(yǎng)基中的一種。最佳為WPM基本培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述步驟2中暗培養(yǎng)時間為14天。

優(yōu)選地，所述步驟3中光照條件下培養(yǎng)時間為28天。

優(yōu)選地，所述步驟4中移栽至栽培基質(zhì)中置于溫室苗床上噴霧系統(tǒng)下生長。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供的一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，以齒葉冬青未成熟合子胚為外植體，建立了齒葉冬青植物組織快速繁殖體系，將齒葉冬青的萌發(fā)時間由常規(guī)育種的2-3年縮短為5-7周，且齒葉冬青組培苗發(fā)芽率高達100％，移栽存活率高達90％左右。

具體實施方式

實施例1

本實施例提供的一種以胚為外植體的齒葉冬青組培快繁方法，包括：