[發(fā)明專利]紅景天苷聯(lián)合異煙肼延長海分枝桿菌斑馬魚模型生存時(shí)間的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010061834.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111066700B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何樹梅;晏博;張舒林
• 申請（專利權(quán)）人: 西藏民族大學(xué)
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10;A61K49/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發(fā)明涉及斑馬魚模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紅景天苷聯(lián)合異煙肼延長海分枝桿菌斑馬魚模型生存時(shí)間的應(yīng)用。紅景天苷用于處理斑馬魚受精卵，異煙肼用于處理注射過海分枝桿菌的的斑馬魚。應(yīng)用過程為：提供AB野生型斑馬魚，斑馬魚交配受精后，將受精卵置于亞甲基蘭溶液中，于28?29℃孵育，7?10時(shí)后，將受精卵卵轉(zhuǎn)入紅景天苷溶液和苯基硫脲溶液的混合溶液中浸泡；按照受精時(shí)間計(jì)算，對受精3天后的斑馬魚注射海分枝桿菌菌液，得到海分枝桿菌斑馬魚模型；注射第二天，將海分枝桿菌斑馬魚模型于異煙肼溶液中培養(yǎng)，每24h更換藥液，直至海分枝桿菌斑馬魚死亡。本研究證明，紅景天苷聯(lián)合異煙肼能延長受感染斑馬魚的生存時(shí)間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及斑馬魚模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紅景天苷聯(lián)合異煙肼延長海分枝桿菌斑馬魚模型生存時(shí)間的應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染性疾病，目前仍然是威脅人類生命健康最主要的傳染病之一。近年來，多藥耐藥和廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌的不斷出現(xiàn)與快速傳播，以及結(jié)核分枝桿菌與人類免疫缺陷病毒共同感染的發(fā)生，使得結(jié)核病的防治更加困難，傳統(tǒng)抗結(jié)核藥物已經(jīng)不能滿足臨床需要，加速研發(fā)新型抗結(jié)核藥物成為當(dāng)務(wù)之急。

結(jié)核病的致病機(jī)制，它是極其復(fù)雜的。結(jié)核分枝桿菌侵入機(jī)體后與宿主相互作用，依靠其本身的毒力、自噬及其免疫逃避機(jī)制在宿主體內(nèi)長期生存，結(jié)核病難治的原因之一。據(jù)估計(jì)，世界上約三分之一的人體中“潛伏”有肺結(jié)核分枝桿菌，這些人可能一生都不表現(xiàn)出肺結(jié)核癥狀，只有10％最終會發(fā)展為結(jié)核病。結(jié)核分枝桿菌侵入機(jī)體后，首先被參與非特異免疫的巨噬細(xì)胞對其進(jìn)行吞噬、殺傷、清除，而結(jié)核分枝桿菌在一些人體內(nèi)可以長期潛伏不發(fā)病，還有部分人群體內(nèi)的巨噬細(xì)胞成為結(jié)核分枝桿菌生存地，不但不能被完全殺滅而且產(chǎn)生耐藥，所以目前巨噬細(xì)胞成為國內(nèi)外專家研究結(jié)核病的熱點(diǎn)。

斑馬魚在基因水平上87％與人類同源，早期發(fā)育與人類極為相似，已成為研究相關(guān)疾病基因的最佳模式生物。近幾十年，斑馬魚-海分枝桿菌模型已被廣泛用于研究結(jié)核病感染替代動物模型。人類結(jié)核病感染和斑馬魚海分枝桿菌感染之間的相似性是驚人的，斑馬魚-海分枝桿菌模型相比于其他分枝桿菌感染模型具有許多優(yōu)點(diǎn)。(1)它們與人類的解剖學(xué)、分子和遺傳具有相似性(2)它們易繁殖和低成本的維護(hù)。(3)基于胚胎和幼蟲的光學(xué)透明度，能夠進(jìn)行大規(guī)模的基于表型的篩選。(4)對人體危害小，生長速度相對較快，操作安全方便，基于以上優(yōu)勢斑馬魚-海分枝桿菌模型已成為研究結(jié)核病致病機(jī)制的新型模型。

利用斑馬魚模型進(jìn)行治療結(jié)核病的藥物篩選具有重要意義，迄今為止，本發(fā)明人未發(fā)現(xiàn)紅景天苷聯(lián)合異煙肼延長海分枝桿菌斑馬魚模型生存時(shí)間的應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了紅景天苷聯(lián)合異煙肼延長海分枝桿菌斑馬魚模型生存時(shí)間的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述紅景天苷用于和苯基硫脲配制成混合溶液浸泡培養(yǎng)斑馬魚受精卵，所述異煙肼用于浸泡培養(yǎng)注射過海分枝桿菌的的斑馬魚。

進(jìn)一步的，所述應(yīng)用包括以下步驟：

S1、提供AB野生型斑馬魚，斑馬魚交配受精后，將受精卵置于亞甲基蘭溶液中，于28-29℃孵育，7-10時(shí)后，將受精卵卵轉(zhuǎn)入紅景天苷和苯基硫脲的混合溶液中浸泡；

S2、按照受精時(shí)間計(jì)算，對受精3天后的斑馬魚注射海分枝桿菌菌液，得到海分枝桿菌斑馬魚模型；

S3、注射第二天，將海分枝桿菌斑馬魚模型于異煙肼溶液中培養(yǎng)，每24h更換藥液，直至海分枝桿菌斑馬魚死亡。

進(jìn)一步的，S1中，所述亞甲基蘭溶液由亞甲基蘭溶于胚胎培養(yǎng)水制成，濃度為0.5mg/L。

進(jìn)一步的，混合溶液由苯基硫脲和紅景天苷溶于胚胎培養(yǎng)水制成。

更進(jìn)一步的，混合溶液中，紅景天苷的終濃度為1.5-1.8mM/ml，苯基硫脲的終濃度為0.295μmol/L。