[發(fā)明專利]一種新冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010061792.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111647683B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張永振;陳燕玫;王文;代發(fā)輝;吳凡;宋志剛;徐琳;裴媛媛;王啟敏;鄭嬌嬌;張玉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市公共衛(wèi)生臨床中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11467
• 代理人: 王雪

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，提供一種新冠狀病毒2019?nCoV核酸檢測試劑盒及其應(yīng)用，該試劑盒可用于診斷人2019?nCoV感染。本發(fā)明所述檢測試劑盒基于Taqman?RT?qPCR實驗技術(shù)，利用設(shè)計的2條引物和一條探針對受試者的臨床樣本核酸進(jìn)行檢測，以有無特異性擴(kuò)增曲線作為判定受試者是否已被2019?nCoV感染，可以以100copies/μL以上的靈敏度和發(fā)熱呼吸道癥候群臨床樣本零交叉反應(yīng)的高度特異性診斷2019?nCoV感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種可用于檢測2019-nCoV感染的檢測試劑盒及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

冠狀病毒(Coronavirus，CoV)屬于套式病毒目(Order:Nidovirales)、冠狀病毒科(Family:Coronaviridae)，是具外套膜(envelope)的單股正鏈RNA病毒，直徑約80-120nm，是一類主要引起呼吸道、腸道疾病的病原體。這類病毒顆粒的表面有許多規(guī)則排列的突起，整個病毒顆粒就像一頂?shù)弁醯幕使冢虼说妹肮跔畈《尽薄９跔畈《境腥救祟愐酝猓€可感染豬、牛、貓、犬、駱駝、蝙蝠、禽類等多種脊椎動物。

感染2019-nCoV的主要臨床特征表現(xiàn)包括發(fā)熱、乏力、干咳，肺部影像表現(xiàn)為散在的斑片狀毛玻璃陰影等。由于這些臨床特征與其他引起肺部感染的病毒，如流感病毒、腺病毒、合胞體病毒等，具有較高的相似之處，僅靠臨床特征無法準(zhǔn)確的區(qū)分該病毒。此外，現(xiàn)有技術(shù)中的冠狀病毒檢測方法主要針對已知的SARS、MERS等冠狀病毒，2019-nCov是一種全新病毒，基因序列與已知冠狀病毒差別大，現(xiàn)有的診斷方法無法識別和區(qū)分新病毒和其他冠狀病毒，故無法應(yīng)對本次疫情，因此急需一種簡便可靠的方法來對疑似感染2019-nCoV的患者標(biāo)本進(jìn)行快速診斷，從而對該病毒的流行病學(xué)進(jìn)行監(jiān)測，并指導(dǎo)臨床對癥治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種用于檢測新型冠狀病毒(2019-nCoV)的檢測試劑盒，用于從不明原因肺炎病人標(biāo)本中快速、特異和高靈敏度地檢測2019-nCoV，為不明原因肺炎的臨床診斷和治療以及疫情防控提供依據(jù)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種2019-nCoV病毒核酸檢測試劑盒，所述試劑盒中包括特異性引物和熒光探針，所述特異性引物和熒光探針序列如下：

上游引物WHCV-F:TGATGATACTCTCTGACGATGCTGT；

下游引物WHCV-R:CTCAGTCCAACATTTTGCTTCAGA；

熒光探針WHCV-P:熒光報告基團(tuán)-ATGCATCTCAAGGTCTAGTG-熒光淬滅基團(tuán)。

優(yōu)選的，上述試劑盒熒光探針中所使用的熒光報告基團(tuán)為FAM、ROX、CY3、CY5、HEX、JOE、TET、VIC、TAMRA；熒光淬滅基團(tuán)為MGB、BHQ1、BHQ2、TAMRA、BHQ-X。

優(yōu)選的，該試劑盒還包括RT-qPCR(Quantitative?real?time?polymerase?chainreaction簡稱?RT-qPCR)緩沖液、DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA酶抑制劑的混合制劑。

優(yōu)選的，試劑盒所述上、下游引物在反應(yīng)體系中的終濃度為8pmol，熒光探針在反應(yīng)體系中的終濃度為：4pmol。