[發明專利]SCAD重組腺病毒載體質粒、SCAD重組腺病毒及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 202010061445.6 | 申請日： | 2020-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN111139265A | 公開（公告）日： | 2020-05-12 |
| 發明（設計）人： | 周四桂;蘇永少;廖英勤;鐘小藝;馮靜韻 | 申請（專利權）人： | 廣東藥科大學 |
| 主分類號： | C12N15/861 | 分類號： | C12N15/861;C12N15/66;C12N15/53;A61K48/00;A61K38/44;A61P9/04;A61P9/00 |
| 代理公司： | 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387 | 代理人： | 喻振興 |
| 地址： | 512000 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | scad 重組 病毒 載體 質粒 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種SCAD重組腺病毒載體質粒，其特征在于，是將SCAD蛋白編碼基因重組至pHBAd-MCMV-GFP載體得到的pHBAd-MCMV-GFP-SCAD，所述SCAD重組腺病毒載體質粒的序列如SEQID NO:1所示。
2.根據權利要求1所述的SCAD重組腺病毒載體質粒的構建方法，其特征在于，其是經Not I和EcoR I雙酶切的pHBAd-MCMV-GFP載體與SCAD蛋白編碼基因連接、轉化后構建而成。
3.根據權利要求2所述的SCAD重組腺病毒載體質粒的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、設計SCAD蛋白編碼基因的引物如下：
SCADS-EcoR I-F:acacgaattcgccaccATGGCCATGGCCGCTGCGT，
SCADS-NotI-R:acacgcggccgcTCAGCTCCGGTAGCTCCGGA；
S2、以含有SCAD蛋白編碼基因的RNA逆轉錄后作為模板，用所述引物和DNA聚合酶進行聚合酶鏈式反應擴增，純化，得到擴增產物；
S3、將pHBAd-MCMV-GFP載體用Not I和EcoR I雙酶切，酶切完成后，膠回收純化；
S4、將步驟S2得到的擴增產物和步驟S3經過雙酶切的載體用T4連接酶進行連接，然后用感受態細胞進行轉化和培養、提取，即可得到重組腺病毒載體質粒pHBAd-MCMV-GFP-SCAD。
4.根據權利要求3所述的SCAD重組腺病毒載體質粒的構建方法，其特征在于，所述的步驟S4中，感受態細胞為DH5α細胞。
5.一種SCAD重組腺病毒，其特征在于，是由權利要求1所述的SCAD重組腺病毒載體質粒和骨架質粒轉染HEK293細胞得到重組腺病毒Ad-SCAD。
6.根據權利要求5所述的SCAD重組腺病毒，其特征在于，所述的骨架質粒為pHBAd-BHG。
7.根據權利要求5所述的SCAD重組腺病毒，其特征在于，所述的轉染HEK293細胞所用的轉染試劑為LipofiterTM。
8.根據權利要求5～7任一項所述的SCAD重組腺病毒在制備預防、緩解和/或治療病理性心肌肥厚、心肌纖維化及心力衰竭的藥物中的應用。
9.根據權利要求5～7任一項所述的SCAD重組腺病毒在制備抑制或治療心血管系統疾病的藥物中的應用。
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