[發明專利]一種齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法

有效

• 申請號: 202010060156.4
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111134019B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 楊玉潔;郝明灼;鄒義萍;耿芳
• 申請（專利權）人: 長江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 江慧

1.一種齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述方法包括：

步驟1、采集齒葉冬青的未成熟種子，清洗消毒后，剝出幼胚作為外植體備用；

步驟2、將所得幼胚接種至體細胞胚誘導培養基上暗培養，獲得體細胞胚，所述體細胞胚誘導培養基包括1/4MS、0.05～0.2mg/L 6-BA、1.3～1.7mg/L 2，4-D、50～70g/L蔗糖、6.2～6.7mg/L瓊脂；

步驟3、將所得的體細胞胚轉移至MS培養基上萌發培養，然后轉移至光照條件下培養至形成生根的完整植株；

步驟4、將所得生根的完整植株移栽至栽培基質中培養。

2.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟1中清洗消毒的具體步驟為：將冬青的未成熟種子用流水沖洗10～30min，轉移至超凈工作臺上用無菌水潤洗；種子的表面消毒先用75％的酒精浸泡5～30min，再用8％次氯酸鈉浸泡10～30min，最后用無菌水沖洗5-6次，放入無菌水中待用。

3.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟2中暗培養時間為25～35天。

4.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述體細胞胚誘導培養基包括1/4MS、0.1mg/L 6-BA、1.5mg/L 2，4-D、60g/L蔗糖、6.5mg/L瓊脂。

5.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟3中體細胞胚轉移至MS培養基上萌發培養時間為12～16天，萌發培養于暗環境下進行。

6.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟3中轉移至光照條件下培養的時間為26～30天。

7.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟3中光照條件下培養的溫度為25±1℃，光照強度為1000-3000Lx，光照時間為16～18h/d。

8.如權利要求1所述的齒葉冬青體細胞胚胎直接發生和植株再生的方法，其特征在于，所述步驟4中移栽至栽培基質中置于溫室苗床上噴霧系統下生長。