[發明專利]適應于草地貪夜蛾的核型多角體病毒的馴化方法及應用

在審

• 申請號: 202010059629.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111117972A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 滕小锘;孫祥明;袁秀麗;金亮
• 申請（專利權）人: 蘇州米迪生物技術有限公司;蘇州市沃美生物技術有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;A01P7/04;C12R1/93
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹;王鋒

1.一種適應于草地貪夜蛾的核型多角體病毒的馴化方法，其特征在于包括：

1)提供苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，并進行紫外照射，之后施加于草地貪夜蛾的人工飼料上，獲得含病毒飼料；

2)以所述含病毒飼料來飼養饑餓的草地貪夜蛾幼蟲，之后收集感毒蟲或死亡蟲，粉碎、過濾，將濾液離心后收集，除菌，獲得游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒；

3)以草地貪夜蛾離體細胞和蟲體交替對所述游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒進行疊代培養和擴增，獲得馴化后的游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒；

4)以所述馴化后的游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒作為毒源，并重復步驟1)～3)，增加馴化代次，最終獲得適應于草地貪夜蛾的核型多角體病毒。

2.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟1)包括：將苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒原粉或原液用無菌水稀釋，經紫外照射后滴加在所述草地貪夜蛾的人工飼料上。

3.根據權利要求2所述的馴化方法，其特征在于：采用無菌水進行稀釋的倍數為5～20倍。

4.根據權利要求2所述的馴化方法，其特征在于：所述紫外照射的強度為50～70μW/cm²，照射時間為1～2小時。

5.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟2)包括：將草地貪夜蛾的卵置于氣候培養箱中孵化并群體飼養，并挑選出3～4齡的草地貪夜蛾幼蟲，其中，所述氣候培養箱的培養條件包括：溫度為25.5～26.5℃，濕度55～65％，光照時長與黑暗時長的比例為12～14:10～12。

6.根據權利要求5所述的馴化方法，其特征在于，步驟2)包括：將所述3～4齡的草地貪夜蛾幼蟲饑餓12～24小時，先喂食所述含病毒飼料，再喂食正常的人工飼料，之后觀察，收集感毒蟲或死亡蟲。

7.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟3)包括：將步驟2)所獲游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒與草地貪夜蛾離體細胞按照體積比為1:15～20混合，7～10天后收集上清液，獲得馴化后的游離態苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒。

8.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于：步驟4)中馴化代次為4代以上。

9.根據權利要求8所述的馴化方法，其特征在于：步驟4)中馴化代次為8～10代。

10.由權利要求1-9中任一項所述馴化方法制得的適應于草地貪夜蛾的核型多角體病毒。