[發明專利]特異性檢測HTLV-II前病毒DNA的引物及其應用

在審

• 申請號: 202010059162.8
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN113136453A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 高歌;周安宇
• 申請（專利權）人: 上海愛薩爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京瀚仁知識產權代理事務所(普通合伙) 11482
• 代理人: 宋寶庫;江宇

1.特異性檢測HTLV-II前病毒DNA的引物對，所述引物對包括正向引物5'-GCATCAAGCATTCTACCCATATAC-3'(SEQ ID NO:1)和反向引物5'-GAAGGTTAGGACAGTCTAGTAGATA-3'(SEQ ID NO:2)。

2.特異性檢測HTLV-II前病毒DNA的引物和探針組合，所述引物對包括正向引物和反向引物，其中正向引物是5'-GCATCAAGCATTCTACCCATATAC-3'(SEQ ID NO:1)，所述反向引物是5'-GAAGGTTAGGACAGTCTAGTAGATA-3'(SEQ ID NO:2)；所述探針的序列為5'-CTGGTCGAGAGAACC-3'(SEQ ID NO:3)，該探針的5’端標記報告熒光基團，3’端標記淬滅基團。

3.根據權利要求2的引物和探針組合，其中所述熒光探針的5’端標記的報告熒光基團為FAM，3’端標記的淬滅基團為NFQ-MGB或TAMRA。

4.根據權利要求1的引物對或根據權利要求2或3的引物和探針組合在檢測樣本中HTLV-II前病毒DNA中的應用。

5.根據權利要求1的引物對或根據權利要求2或3的引物和探針組合在制備用于檢測樣本中HTLV-II前病毒DNA的試劑中的應用。

6.根據權利要求4或5的應用，其中所述檢測是qPCR檢測或微滴式數字PCR(ddPCR)檢測。

7.特異性檢測HTLV-II前病毒DNA的試劑盒，該試劑盒包括根據權利要求1的引物對，或包括根據權利要求2或3的引物和探針組合。

8.根據權利要求7的試劑盒，所述試劑盒還包括選自qPCR反應液、水、HTLV-II前病毒DNA標準品、對照品中的任意一種或更多種試劑，或者包括選自ddPCR反應液、水中的任意一種或更多種試劑。

9.檢測樣本中HTLV-II前病毒DNA的方法，包括使用根據權利要求1的引物對，或使用根據權利要求2或3的引物和探針組合，對樣本DNA進行qPCR檢測或ddPCR檢測，根據qPCR檢測結果定性檢測或定量檢測樣本中是否存在HTLV-II前病毒DNA。

10.檢測樣本中HTLV-II前病毒DNA的方法，包括以下步驟：

(1)提取樣本DNA；

(2)使用根據權利要求1的引物對，或使用根據權利要求2或3的引物和探針組合，對HTLV-II前病毒DNA標準品和樣本DNA進行qPCR檢測，其中HTLV-II前病毒DNA標準品是用含有HTLV-II前病毒DNA片段的DNA配制的不同給定濃度的樣品；

(3)用HTLV-II前病毒DNA標準品的qPCR檢測結果制作標準曲線，擬合線性方程，其中R²≥0.99；且各標準品濃度的準確度(RE％)為-75％～150％，確定可穩定檢測到的濃度最低點；

(4)結果判定：如果樣本DNA的qPCR結果中出現明顯的擴增曲線；且樣本DNA的qPCR的Ct值小于濃度最低點的Ct值，則為陽性結果，即樣本中存在HTLV-II前病毒DNA；如果無明顯擴增曲線，或者有明顯擴增曲線，但Ct值大于標準曲線濃度最低點的Ct值，則為陰性結果，即樣本中不存在HTLV-II前病毒DNA。

11.根據權利要求10的方法，其中步驟(4)進一步包括：根據樣本DNA的Ct值和擬合的標準曲線，確定樣本DNA中HTLV-II前病毒DNA的濃度。