本發明屬于蛋白酶技術領域，具體涉及一中幾丁質脫乙?；?。所述幾丁質脫乙?；窻CDA來源于Rhodococcus equi，具有序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，是目前首次報道的一種新型的蛋白序列，與已報道的幾丁質脫乙?；傅鞍仔蛄邢嗨贫容^低，且具有底物譜較寬；受金屬離子影響小等特性。

技術領域：

本發明屬于蛋白酶技術領域，具體涉及一中幾丁質脫乙酰基酶。

背景技術：

甲殼素又名幾丁質，學名為(1，4)-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-葡聚糖，是自然界生物所含有的一種含量僅次于纖維素的氨基多糖，主要存在于無脊椎動物，如蝦、昆蟲、海藻、真菌及酵母中。但是甲殼素不溶于水、酸、堿和有機溶劑，所以其沒有太大的商業價值，而其脫去乙?；蟮漠a物殼聚糖則廣泛應用于醫藥、食品、化工、化妝品等行業。目前生產殼聚糖主要使用的化學法存在諸多問題，例如，反應時間長、能耗大、產品質量不穩定，特別是排放物會造成巨大的環境污染。

幾丁質脫乙酰酶(Chitin deacetylase，CDA)可以水解脫掉幾丁質上的乙?；?，生產脫乙酰度穩定、分子質量分布范圍窄的高品質殼聚糖產品，且反應條件溫和，為解決殼聚糖生產中的環境污染問題提供了一條新的途徑。目前報道的CDA的生產菌株大部分都是真菌，而且來源于真菌的這些CDA大多都是糖蛋白，必須經過糖基化修飾才有活性；目前報道的細菌來源的CDA較少，而且大部分都是幾丁寡糖脫乙酰酶，可作用的底物譜較窄，且存在所產酶活力低、提純后的酶活力下降、基因工程菌酶活提升不明顯等問題，目前仍未實現產業化。因此，篩選性能優良且細菌來源的新型CDA是解決CDA工業化應用的重要課題之一，具有重要的實用價值和學術研究價值。

發明內容：

針對現有技術的不足，本發明旨在提供一中幾丁質脫乙酰基酶及其應用，所述幾丁質脫乙?；窻CDA來源于Rhodococcus equi，是目前首次報道的一種新型的蛋白序列，與已報道的幾丁質脫乙酰基酶蛋白序列相似度較低(圖1)。

所述幾丁質脫乙?；窻CDA具有序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

本發明還保護編碼SEQ ID NO.1所示RCDA的基因；

本發明還提供所述幾丁質脫乙?；窻CDA在水解幾丁質中的應用。

本發明提供的幾丁質脫乙?；窻CDA具有以下酶學性質：

(1)RCDA的最佳反應溫度為45℃，可耐受溫度為小于55℃；

(2)RCDA的最佳反應pH為7.0，酶活溫度的pH范圍為5.0-9.0；

(3)離子濃度在1mM以下時，金屬離子對其酶活性影響不大，而當離子濃度在1mM以上時，Zn²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺對CDA活性有較強的抑制作用；

(4)RCDA的底物譜較寬，對低分子量幾丁寡糖、膠體幾丁質、乙二醇幾丁質以及具有一定脫乙酰度的殼聚糖都具有脫乙?；钚裕瑢б阴；亩喾N氨基酸也表現出了脫乙?；钚?。

有益效果：

與已經報道的細菌CDA相比，RCDA的底物譜更寬，能夠作用于大分子的底物，對脫乙酰度85％的殼聚糖的脫乙酰相對活性達到132.94％，對膠體幾丁質的相對活性達到111.2％，對乙二醇幾丁質的相對活性為89.12％。此外，RCDA對帶乙酰基的氨基酸底物也表現出較高的活性，包括N-乙酰-DL-蛋氨酸、N-乙酰-DL-色氨酸、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-乙酰-L-亮氨酸，這些都是首次被報道。

附圖說明：

圖1系統進化分析；

圖2酶學特性分析