[發明專利]基于CL7-CVN和Im7系統分離、富集和檢測囊膜病毒的方法

有效

• 申請號: 202010058494.4
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111206021B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 余曉嵐;王斌;王飛;馬立新;楊智;劉敏;高丹;陳冠軍
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;C12Q1/70;C12Q1/6851
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛

1.一種基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將CL7-CVN的表達載體轉化至第一宿主細胞中，誘導表達，純化后得到重組CL7-CVN蛋白；

（2）將Im7的表達載體轉化至第二宿主細胞中，誘導表達，純化后得到Im7蛋白；

（3）將Im7蛋白與微球偶聯反應，得到Im7-Beads微球；

（4）將待分離富集的囊膜病毒樣品、重組CL7-CVN蛋白溶液及Im7-Beads混合后，孵育，離心得到富集囊膜病毒的Im7-Beads微球；

其中所述步驟(3)具體為：

S1：菊糖配制成溶液，加入六偏磷酸鈉，充分攪拌溶解；再向體系中滴加碳酸鈉溶液反應，反應結束后，離心得到沉淀，沉淀洗滌分散后得到Beads分散液；

S2：取乳化劑作為油相液，將所述步驟(2)得到的純化的Im7蛋白、及Beads分散液分別逐滴加入上述油相液中，乳化后得到初步乳液；再將原花青素溶液逐滴加至所述初步乳液中，攪拌反應，反應結束后離心收集沉淀，洗滌后，得到Im7-Beads微球，于Na₃N保存。

2.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S1步驟中，六偏磷酸鈉占菊糖的投入質量百分比為8%-10%。

3.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S1步驟中，滴加的碳酸鈉溶液用于調節pH至10-10.5，反應溫度控制為40-50℃，反應時間為3.5-4.0h，反應結束后調節pH至中性，反應結束后用95%乙醇溶液將反應結束后的溶液沉淀，沉淀用去離子水洗滌和分散。

4.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步驟中，Im7、Beads和原花青素的結合質量比為(200-300) : (100-150) :(0.02-0.025)，并且Im7溶液、Beads分散液和原花青素溶液的體積相等。

5.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步驟中，Im7、Beads和原花青素的結合質量比為(250-300) : (120-150) :0.02。

6.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步驟中，乳化的時間為40-60min；將原花青素溶液逐滴加至初步乳液后，水浴控制溫度37℃，反應時間40-48h，反應結束后離心收集沉淀，用異丙醇洗滌。

7.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，CL7-CVN與Im7-Beads混合的摩爾體積比為2.5-20μmol/mL。

8.如權利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系統分離和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述步驟(4)中孵育的時間為40-100min。