[發(fā)明專利]具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010058081.6
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111018953B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃勃;何亞瓊;羅飛飛;胡豐林;尉杰;趙鋮
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C12P21/02;A61P31/10;A61P39/06;C12R1/645
• 代理公司: 合肥金安專利事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 34114
• 代理人: 金惠貞

本發(fā)明涉及具有抗真菌活性和清除自由基活性的環(huán)酪?異亮?亮?色?蘇肽（Tyr?Ile?Leu?Trp?Thr環(huán)肽）及制備方法，屬于生物制品的提取制備技術(shù)領(lǐng)域。所述環(huán)酪?異亮?亮?色?蘇肽是由酪氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸和蘇氨酸，以酰胺鍵連接而成的十五元環(huán)狀五肽。這是一個新化合物，尚無文獻報道。該化合物可通過培養(yǎng)蛙糞霉，然后提取分離得到。環(huán)酪?異亮?亮?色?蘇肽純品為白色粉末，對DPPH自由基的半數(shù)清除濃度（DC₅₀）為：0.82 mg/mL，在200μg/mL的濃度下對白色鏈珠菌的抑菌圈直徑為11.36 mm。該化合物具有制備抗菌藥物和抗氧化抗衰老保健品的潛力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品的提取制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及具有抗真菌和自由基清除活性的環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽（Tyr-Ile-Leu-Trp-Thr環(huán)肽）提取和純化。

背景技術(shù)

環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽是從一種蛙糞霉(Basidiobolussp. )培養(yǎng)物中分離制備得到的具有抗真菌和清除自由基活性的生物活性物質(zhì)。

蛙糞霉(Basidiobolussp. )為蟲霉目蛙糞霉科蛙糞霉屬的真菌；在我國常見的有蛙生蛙糞霉、固孢蛙糞霉和裂孢蛙糞霉等。上述菌種可從土壤和兩棲類動物糞便中分離得到。

抗真菌活性：有多種真菌是條件致病菌，當人們抵抗力下降時容易感染，特別是老人和病人容易發(fā)生真菌感染。目前世界老齡化日趨嚴重，同時由于環(huán)境污染等因素，人們的抵抗力呈下降趨勢，真菌感染病例呈上升趨勢，同時早期抗真菌藥已出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，因此開發(fā)新型抗真菌活性物質(zhì)非常有意義。

清除自由基活性：自由基（free radical），從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看是指含未配對電子的基團、原子或分子。自由基具有高度化學(xué)活性。對于生命體來說，自由基是生命活動中多種生化反應(yīng)的中間產(chǎn)物。在正常情況下，人體內(nèi)的自由基是處于產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡之中。自由基是機體有效的防御系統(tǒng)，如不能維持一定水平的自由基則會對機體生命活動帶來不利影響。但自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，它通過攻擊生命大分子物質(zhì)及各種細胞器，會造成機體分子水平、細胞水平及組織器官水平的各種損傷，加速機體的衰老進程并誘發(fā)各種疾病。最新的研究表明，人類的衰老及許多疾病都與自由基損傷有關(guān)。具有清除自由基活性的物質(zhì)能與自由基反應(yīng)并使之還原成非自由基化合物，可清除機體代謝過程中產(chǎn)生的過多的自由基，是一種可增進人體健康的重要活性物質(zhì)。自由基清除劑在非生命體系中有抗氧化作用，能夠有效地阻止物質(zhì)的氧化敗壞，對于延長物品的保質(zhì)期有著重要作用，被廣泛用于食品、藥品、日用化學(xué)品等中。

發(fā)明內(nèi)容

為尋找新型天然高效的具有抗真菌活性和清除自由基活性的物質(zhì)，發(fā)明人通過對中國的100余株昆蟲病原真菌代謝物進行活性研究，發(fā)現(xiàn)了從一種蛙糞霉中提取的環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽具有很強的抗白色鏈珠菌活性和清除自由基活性的作用。

具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽的結(jié)構(gòu)式如下：

所述環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽是由酪氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、色氨酸和蘇氨酸，以酰胺鍵連接而成的十五元環(huán)狀五肽；

所述環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽具有清除自由基活性和抗白色鏈珠菌的活性；對二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）的半數(shù)清除濃度（DC₅₀）為：0.82mg/mL；在200 μg /mL的濃度下對白色鏈珠菌的抑菌圈直徑為11.36mm。

具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)酪-異亮-亮-色-蘇肽的制備操作步驟如下：

（1）菌種培養(yǎng)

將蛙糞霉（Basidiobolussp.）經(jīng)過斜面菌種培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)、三級液體種子培養(yǎng)和四級培養(yǎng)，得到液體的最終發(fā)酵物或固體的最終發(fā)酵物；