[發明專利]適應于黃楊絹野螟的核型多角體病毒的馴化方法與應用

在審

• 申請號: 202010057058.5
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111117971A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 孫祥明;滕小锘;袁秀麗;金亮
• 申請（專利權）人: 蘇州米迪生物技術有限公司;蘇州市沃美生物技術有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;A01P7/04;C12R1/93
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹;王鋒

1.一種適應于黃楊絹野螟的核型多角體病毒的馴化方法，其特征在于包括：

1)提供核型多角體病毒，并加水稀釋10～20倍并施加于小葉黃楊枝葉上，獲得含病毒飼料；

2)先以苦參堿對黃楊絹野螟幼蟲進行處理，再以所述含病毒飼料來飼養饑餓的黃楊絹野螟幼蟲，之后收集感毒蟲或死亡蟲，粉碎、過濾，將濾液離心后收集，除菌，獲得馴化后的游離態核型多角體病毒；

3)以所述馴化后的游離態核型多角體病毒作為毒源，并重復步驟1)～2)，增加馴化代次；

4)對步驟3)所獲馴化后的游離態核型多角體病毒進行蟲體培養和擴增，之后提純，最終獲得適應于黃楊絹野螟的核型多角體病毒。

2.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟1)包括：將核型多角體病毒農藥用無菌水稀釋后浸泡小葉黃楊枝葉。

3.根據權利要求2所述的馴化方法，其特征在于：所述核型多角體病毒農藥與無菌水的體積比為1：10～20。

4.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于：所述核型多角體病毒包括苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒、茶尺蠖核型多角體病毒、斜紋夜蛾核型多角體病毒或甜菜夜蛾核型多角體病毒。

5.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟2)包括：將黃楊絹野螟的卵置于氣候培養箱中孵化并群體飼養，并挑選出3～4齡的黃楊絹野螟幼蟲，其中，所述氣候培養箱的培養條件包括：溫度為25.5～26.5℃，濕度55～65％，光照時長與黑暗時長的比例為14～12：10～12。

6.根據權利要求5所述的馴化方法，其特征在于，步驟2)包括：將所述3～4齡的經過苦參堿處理的黃楊絹野螟幼蟲饑餓12～24小時，先喂食所述含病毒飼料，再喂食正常的小葉黃楊枝葉，之后觀察，收集感毒蟲或死亡蟲。

7.根據權利要求1所述的馴化方法，其特征在于，步驟3)中馴化代次為20～30代。

8.由權利要求1-7中任一項所述馴化方法制得的適應于黃楊絹野螟的核型多角體病毒。