[發明專利]一種利用線粒體分子標記鑒定柑橘潛葉蛾的方法

在審

• 申請號: 202010056887.1
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111118175A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 劉虹伶;劉旭;陳慶東;陳松;蒲德強;劉月悅;李超;陳倩穎;陳圓;楊明;雷應華;易春燕;張翠翠
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張雪

本發明公開了一種利用線粒體分子標記鑒定柑橘潛葉蛾的方法，屬于分子生物學技術領域，該分子標記包括以下引物：F：5’?ATTGCCCACGGTGGTAGATC?3’；R：5’?ACTGCTCCTATGGAAAGAACGT?3’；該方法包括(1)提取供試樣品中的DNA；(2)采用上述的線粒體分子標記對供試樣品的模板DNA進行PCR，獲取PCR擴增產物；(3)所得PCR擴增產物進行凝膠電泳，對電泳檢測結果通過分析基本核心SSR結果，確定其品種；該線粒體分子標記挑選的引物具有擴增穩定、條帶清晰易判讀、多態性高、重復性好，可有效用于柑橘潛葉蛾鑒定、DNA指紋圖譜構建及遺傳多樣性評價及系統發育研究領域。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別是涉及一種利用線粒體分子標記鑒定柑橘潛葉蛾的方法。

背景技術

柑桔潛葉蛾Phyllocnistis citrella Stainton,屬鱗翅目(Lepidoptera),葉潛蛾科(Phyllocnistidae),是柑桔以及部分蕓香科植物上的一種危害性較大的害蟲。在亞洲、北美洲、大洋洲和非洲的許多國家與地區都有分布，在我國江蘇、福建、浙江、海南、廣西、廣東、湖南、湖北、貴州、四川、重慶等柑橘產區也普遍發生，給柑橘產業造成了嚴重的經濟損失。

柑橘樹因柑橘潛葉蛾危害而造成大量傷口，容易誘發潰瘍病的發生，給害螨、盾蚧、粉蚧和卷葉蟲等提供了良好的過冬場所。柑橘潛葉蛾能導致樹體衰弱，落果嚴重，引起柑橘產量和品質低下，威脅柑橘產業和果品安全。

目前采用的防治時期一般是選擇成蟲羽化期和低齡幼蟲期，防治成蟲可在傍晚進行；防治幼蟲，宜在晴天午后用藥。可噴施10％二氯苯醚菊酯2000-3000倍液，或2.5％溴氰菊酯2500倍液，或25％殺蟲雙水劑500倍液，或25％兩維因可濕性粉劑500-1000倍液，或5％吡蟲啉乳油1500倍液。每隔7-10天噴1次，連續噴3-4次。雖然化學藥劑的使用可以達到一定的效果，但是長期使用容易造成化學藥物殘留，并且柑橘潛葉蛾還可能產生抗藥性，目前為止沒有很好的預防方式。

生物預防病蟲害是一種有效且環保的方式，但是對于柑橘潛葉蛾自身的遺傳信息的研究卻少有研究和報道，使得如何利用生物信息防治柑橘潛葉蛾的危害受到極大限制。

基于柑橘潛葉蛾對于柑橘的嚴重危害，嚴重影響柑橘種植業的發展，開展柑橘潛葉蛾的品種鑒定、指紋圖譜構建、遺傳多樣性評價及系統發育關系研究均有重要意義，然而上述工作都依賴于多態性高，重復性好、標記穩定、帶型清晰易判讀的分子標記的開發。基于此，發明人首次對柑橘潛葉蛾線粒體全基因組進行了測序，并對其生物學特性進行了分析，并進行了系統發育分析，以確定其在葉潛蛾科Phyllocnistidae中的地位。這為后期柑橘潛葉蛾的鑒定，以及生物防治柑橘潛葉蛾危害柑橘提供了理論基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用線粒體分子標記鑒定柑橘潛葉蛾的方法，以解決上述現有技術存在的問題，該分子標記挑選的引物具有擴增穩定、電泳條帶清晰易判讀，并且多態性高，重復性好，可有效用于柑橘潛葉蛾鑒定、DNA指紋圖譜構建及遺傳多樣性評價及系統發育研究領域。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種用于鑒定柑橘潛葉蛾的線粒體分子標記，包括以下引物：

F：5’-ATTGCCCACGGTGGTAGATC-3’；

R：5’-ACTGCTCCTATGGAAAGAACGT-3’。

本發明還提供了一種利用線粒體分子標記鑒定柑橘潛葉蛾的方法，包括以下步驟：

(1)提取供試樣品中的DNA；

(2)采用上述的線粒體分子標記對供試樣品的模板DNA進行PCR，獲取PCR擴增產物；