[發明專利]一種從人胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法

有效

• 申請號: 202010056742.1
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111172106B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 夏黎明;王亮;萬陽
• 申請（專利權）人: 廣州益養生物科技有限公司;廣州暨大美塑生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K8/99;A61K8/98;A61Q19/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

本發明提供了一種從胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法。該方法可有效縮短間充質干細胞原代細胞培養時間，對組織塊傷害小，可以穩定進行多次間充質干細胞原代培養，操作簡便，實用性強，因此本發明在間充質干細胞原代細胞培養及其應用等方面具有廣闊的應用前景。在此基礎上，發明人還提供了一種純化間充質干細胞的培養方法，可將細胞純度提高到99％。本發明還公開了一種提取間充質干細胞分泌物的方法，建立了相關的質量控制與評價實驗，使得間充質干細胞分泌物能有效地在化妝品、保健品等行業進行應用。本發明不僅適用于人和小鼠等間充質干細胞培養，同時也適用于骨髓或脂肪來源的干細胞、癌旁組織等細胞培養。

技術領域

本發明涉及干細胞及其分泌物提取技術，特別是一種從人胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法。

背景技術

干細胞，是一類具有自我復制能力和多向分化潛能的細胞，在一定條件下，可以分化成多種功能細胞及組織，具有免疫調節、再生修復等生物學功能。間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是來源于中胚層的成體干細胞，廣泛存在于全身結締組織和器官間質中，在體內或體外特定的誘導條件下可分化為骨、軟骨、脂肪、肌肉及神經細胞等，且具有促進組織修復、免疫調節和支持造血的功能，免疫原性低，所以MSCs是再生醫學和免疫調節治療最具應用前景的組織工程種子細胞。干細胞分泌物，是干細胞經過特殊培養后分泌出的多種活性物質，包括蛋白質、細胞因子、多肽等等，在抗衰老、美容、細胞修復等方面具有功效。

間充質干細胞相對于其他干細胞，其來源廣泛，目前已經從骨髓、脂肪、肌肉、心臟、臍帶血、臍帶、胎盤等組織中相應找到。

目前，間充質干細胞的分離培養方法主要有兩類：酶消化法和組織塊貼壁法。不同分離方法獲得的間充質干細胞的純度不等，這極大地影響了治療效果的穩定性，且MSCs的不同亞群在疾病治療方面有著不同的作用。

本發明提供了一種從胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法。該方法在常規組織塊貼壁法的基礎上，加以優化改良：采用少量多次加液方式，使小組織也能達到優良的貼壁效果；同時使用自主研發的間充質干細胞選擇性選擇性完全培養基，使間充質干細胞原代細胞快速爬出生長，且純度在95％以上；在此基礎上，發明人還提供了一種純化間充質干細胞的培養方法，可將細胞純度提高到99％。同時，本發明公開了一種提取間充質干細胞分泌物的方法，設計了一系列相關的質量控制與評價實驗，使得間充質干細胞分泌物能有效地在化妝品、保健品等行業進行應用。本發明提供的方法可有效縮短間充質干細胞原代細胞培養時間，對組織塊傷害小，可以穩定進行多次間充質干細胞原代培養，操作簡便，實用性強，因此本發明在間充質干細胞原代細胞培養及其應用等方面具有廣闊的應用前景。本發明不僅適用于人和小鼠等間充質干細胞原代細胞培養，同時也適用于骨髓來源干細胞、脂肪來源干細胞、癌旁組織等原代細胞培養。

發明內容

為了解決現有技術中存在的種種缺陷，本發明在常規組織塊貼壁法的基礎上，加以優化改良，旨在提供一種從胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法，在保證細胞活率高的同時，有效提高貼壁率，縮短獲得穩定高純度細胞所需要的原代培養時間。具體地，本發明提供了以下技術方案，以實現上述目的：

第一方面，本發明提供了一種從胎盤或臍帶中提取間充質干細胞及提取其分泌物的方法，包括以下步驟：

步驟(1)：胎盤或臍帶收集：

1.1根據評判標準：符合是健康產婦(病毒檢測結果陰性、遺傳病檢查項目陰性等)，足月嬰兒，剖腹產等條件的胎盤或臍帶方能收集)進行篩選，根據樣本收集標準進行胎盤或臍帶收集操作；

1.2將胎盤或臍帶裝入無菌容器中，無菌容器內保存液(含慶大霉素的生理鹽水)必須浸沒過胎盤或臍帶，密封容器并在4℃條件下8小時內運送回潔凈實驗室。

步驟(2)、原代細胞處理：

2.1胎盤處理：