[發明專利]用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010053684.7
• 申請日: 2020-01-17
• 公開（公告）號: CN111007053B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 任林嬌;姜利英;秦自瑞;張培;王慰;張吉濤;王延峰;姜素霞
• 申請（專利權）人: 鄭州輕工業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

1.用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）將探針Ⅰ和探針Ⅱ分別加入TCEP溶液中活化2h，得核酸適體溶液和HDNA-FAM溶液；

（2）將納米金溶液與步驟（1）的核酸適體溶液混合并振蕩培養12h，得混合液；

（3）向步驟（2）的混合液中加入NaCl溶液，振蕩培養24h后，離心、去除上清液并將沉淀分散于Tris-CH₃COOH緩沖液中，最后加入步驟（1）的HDNA-FAM溶液，即得熒光適體傳感器溶液；

所述步驟（1）中探針Ⅰ的DNA序列為5’-SH-CTACCCTAGC-3’；探針Ⅱ的DNA序列為5’-GCTACCCTAG-FAM-3’。

2.根據權利要求1所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述核酸適體溶液中探針Ⅰ的終濃度為5μM、HDNA-FAM溶液中探針Ⅱ的終濃度為5μM。

3.根據權利要求2所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述TCEP溶液的濃度為100mM，TCEP溶液中含有20mMTris-CH₃COOH。

4.根據權利要求1所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中納米金溶液的濃度為12.5μg/mL，納米金溶液與步驟（1）的核酸適體溶液的體積比為（1-8）：1。

5.根據權利要求1所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中NaCl溶液的濃度為2mol/L，Tris-CH₃COOH緩沖液的濃度為10mmol/L、pH為7，Tris-CH₃COOH緩沖液的體積不小于600μL。

6.根據權利要求5所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：加入NaCl溶液的具體操作為：每隔3h加一次，最終使NaCl的濃度達到0.1-0.4 mol/L；離心的條件為14000rpm離心20min。

7.根據權利要求6所述的用于檢測銀離子濃度的熒光適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述熒光適體傳感器溶液中探針Ⅰ和探針II的物質的量比為1：1。

8.權利要求1-7任一項所述的 方法所制備的熒光適體傳感器，其特征在于：所述熒光適體傳感器基于熒光共振能量轉移原理，將DNA功能化的納米金作為能量受體，修飾在核酸適體上的FAM作為能量供體。

9.權利要求8所述的熒光適體傳感器在靈敏、特異性的檢測水環境中的銀離子濃度的應用，其特征在于，檢測步驟為：向熒光適體傳感器溶液中加入100μL待測樣本，于30℃孵化40min，取出600μL放入熒光光譜儀，檢測熒光強度值，代入線性回歸方程y=-0.87419x+235.5907， R²=0.994997，即可得出待測樣本中銀離子濃度。