[發(fā)明專利]靶向人CD19的嵌合抗原受體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010051900.4
• 申請日: 2020-01-17
• 公開（公告）號: CN111187352B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李俊;郭志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 南京藍(lán)盾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉莉

本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物領(lǐng)域，尤其涉及一種靶向人CD19的嵌合抗原受體及其應(yīng)用；本發(fā)明的靶向CD19的嵌合抗原受體包含抗CD19人源化抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，跨膜區(qū)及胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域，本發(fā)明還提供了一種靶向人CD19的嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞，能夠特異地與腫瘤細(xì)胞表面的CD19結(jié)合，進而對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生特異的殺傷作用。本發(fā)明還涉及所述靶向人CD19的嵌合受體及其免疫效應(yīng)細(xì)胞在制備抗腫瘤免疫治療藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物領(lǐng)域，尤其涉及一種靶向人CD19的嵌合抗原受體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

CD19又名B4或Leu-12，特異的表達(dá)在正常和惡性B淋巴細(xì)胞膜表面，以及濾泡樹突狀細(xì)胞膜表面，屬于免疫球蛋白(Ig)超家族成員，其分子量為95kDa，位于16號染色體的短臂上，含有15個外顯子，編碼556個氨基酸的I型跨膜糖蛋白。CD19是B細(xì)胞最可靠的表面標(biāo)記物之一，其最早在晚期祖B細(xì)胞和早期前B細(xì)胞中表達(dá)，發(fā)生在免疫球蛋白基因重組時。CD19在整個B細(xì)胞的發(fā)育和成熟過程中均高表達(dá)，直至B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞時，表達(dá)量下調(diào)，其在成熟B細(xì)胞中的表達(dá)是未成熟細(xì)胞的3倍。

CD19通過同時調(diào)節(jié)B細(xì)胞受體(B cell recertor,BCR)依賴和非依賴信號建立B細(xì)胞信號閾值，對B細(xì)胞的發(fā)育，增殖和分化起著重要的調(diào)控作用。CD19作為成熟B細(xì)胞的表面多分子復(fù)合物的主要組成部分，與受體CD21(CD2)，CD81(TAPA-1)以及CD225共同形成復(fù)合體，通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性和受體誘導(dǎo)信號減少觸發(fā)B細(xì)胞分裂及分化所需抗原濃度的閾值。CD81作為伴侶蛋白，提供信號傳導(dǎo)途徑的分子對接位點，并且調(diào)節(jié)CD19的表達(dá)。CD19通過招募和放大Src家族蛋白酪氨酸激酶的活化，使蛋白酪氨酸激酶(PTK)激活，激活BCR信號。同時當(dāng)BCR信號激活時，CD19也可通過活化PI3K和下游的Akt激酶，增強BCR信號，促進B細(xì)胞的增殖。

CD19對B細(xì)胞的增殖和分化具有重要的調(diào)控作用。CD19在幾乎所有的B細(xì)胞惡性腫瘤中廣泛表達(dá)，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤等，因此CD19成為B細(xì)胞惡性腫瘤治療的特異性分子靶點。近年來靶向CD19的免疫治療策略在臨床前以及臨床研究中廣泛發(fā)展，包括單克隆抗體、雙特異性抗體和嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞(CAR-T)，并取得了顯著優(yōu)于常規(guī)小分子化療方案的臨床效果，推動了免疫治療的進展。

嵌合抗原受體主要由兩部分構(gòu)成，一端位于細(xì)胞外能夠特異性識別癌細(xì)胞表面的某一抗原，另一端位于胞內(nèi)含有信號激活元件(如T細(xì)胞受體的Zeta鏈)，起傳遞信號激活T細(xì)胞的作用。將識別腫瘤表面特異性抗原的單克隆抗體高變區(qū)序列在體外重組、亞克隆為單鏈抗體片段(Single chain antibody fragment of variable regions，scFv)，再與其他基因的跨膜蛋白片段和胞內(nèi)信號肽融合形成人造的嵌合抗原受體(Chimeric antigenreceptor，CAR)，轉(zhuǎn)染至T細(xì)胞內(nèi)而形成嵌合抗原受體T細(xì)胞(Chimeric antigen receptor，CAR-T)。CD19-CAR嵌合抗原受體免疫療法改變了惡性血液病治療的傳統(tǒng)方法，并在臨床I期的研究中取得了令人矚目的成果。

目前，絕大多數(shù)CD19CART臨床試驗都采用的是鼠源CD19抗體作為胞外區(qū)。鼠源抗體具有較高的免疫原性，容易被機體的免疫系統(tǒng)清除，影響CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)存活的時間。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種良好特異性、較高殺傷力、較低免疫原性的人源化CD19嵌合抗原受體及其應(yīng)用。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的一種靶向人CD19的嵌合抗原受體，包含基于CD19抗原的人源化CD19抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)及胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域；其中，所述CD19抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域重鏈序列如SEQ ID NO：1所示，輕鏈序列如SEQ ID NO：2所示。