[發明專利]一種提高粗毛栓菌木質素過氧化物酶產量的方法

在審

• 申請號: 202010050152.8
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111172126A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 王偉東;李靈靈
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京眾澤信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11701
• 代理人: 王曉紅

本發明公開了一種提高粗毛栓菌(Trametes hirsuta)木質素過氧化物酶產量的方法，將預培養的粗毛栓菌按6?9％(v/v)的接種量接種到基礎產酶培養基中，并在溫度30℃?40℃、pH 5?7、轉速140?180rpm的條件下進行發酵培養。利用本發明的方法，木質素過氧化物酶酶活比未優化前提高322.89％，酶產量比未優化前提高321.43％。本發明的方法操作簡單，易于放大生產，適于大規模木質素過氧化物酶發酵，從而降低木質素過氧化物酶生產成本，滿足規模化應用的要求。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種提高粗毛栓菌(Trametes hirsuta)木質素過氧化物酶產量的方法。

背景技術

木質素過氧化物酶(Lignin peroxidase，Lip)是由白腐菌分泌的主要胞外酶之一，它是一種含亞鐵紅血素的過氧化物酶，最早是在金孢展齒革菌(Phanerochaetechrysosporium)中發現的，木質素過氧化物酶的活性中間體具有比其它過氧化物酶更高的氧化潛能，能夠氧化苯酚、芳香胺、芳香醚、甲氧基芳香環和多環芳香化合物等物質，進而能夠有效降解木質素，去除多種有毒物質，且由于其氧化生成的產物不污染環境，因此在食品、造紙、環境保護及其它領域具有很大的研究價值和應用潛力。

粗毛栓菌作為白腐菌的一員，相比于香菇(Lentinula)、側耳菌(Pleurotus)、平革菌(Phanerochaete)等真菌，具有較強的產木質素過氧化物酶能力，可作為生物制漿、紙漿漂白、環境保護等方面的理想菌株。但是其木質素過氧化物酶產量低導致其生產和應用成本較高，難以滿足工業化生產的需要。因此，低成本高產量成為木質素過氧化物酶生產研究的主要目的。目前提高木質素過氧化物酶酶產量常用的方法是篩選高產菌株及木質素過氧化物酶基因的克隆和異源表達。高產菌株的獲得周期長、效率低，木質素過氧化物酶基因的克隆和異源表達涉及基因工程改造，工作難度大，但通過對木質素過氧化物酶發酵培養基的溫度、pH、轉速和接種量等條件進行優化，不僅操作簡單、成本低、周期短，還能夠提高木質素過氧化物酶產量，這在一定程度上為工業化生產奠定了基礎。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種提高粗毛栓菌木質素過氧化物酶產量的方法。該方法能夠大幅提高粗毛栓菌的木質素過氧化物酶產量，且操作簡單，易于擴大生產，適于大規模木質素過氧化物酶發酵，從而降低木質素過氧化物酶生產成本，滿足規模化應用的要求。

為實現本發明的目的，本發明提供了一種提高粗毛栓菌產木質素過氧化物酶的方法，所述方法包括以下步驟：

1)將粗毛栓菌活化和預培養，

2)將預培養的粗毛栓菌接種到基礎產酶培養基中，并在溫度30℃-40℃、pH 5-7、轉速140-180rpm的條件下進行發酵培養，接種量按體積計為所述培養基體積的6-9％(v/v)，和

3)培養至發酵液中木質素過氧化物酶酶活達到峰值時，結束發酵并收集發酵液。

在本發明的提高粗毛栓菌木質素過氧化物酶產量的方法中，活化包括：將粗毛栓菌接種到PDA固體培養基上，于25℃-30℃培養3-5天。

在本發明的提高粗毛栓菌木質素過氧化物酶產量的方法中，預培養包括將活化的粗毛栓菌菌絲接種到PDA液體培養基中，于25℃-30℃、120rpm條件下培養3-5天，混勻后按5％(v/v)的接種量接入新的PDA液體培養基中，培養3天，即得預培養的菌絲體。