[發(fā)明專利]膜蛋白YcbM的表達(dá)載體及其表達(dá)純化方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010049434.6 | 申請(qǐng)日： | 2020-01-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113136395A | 公開（公告）日： | 2021-07-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周敏;張?jiān)窐E;陳宇航;盧穎洪 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 南京理工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/70 | 分類號(hào)： | C12N15/70;C12N15/31;C12N15/65;C07K14/245 |
| 代理公司： | 南京理工大學(xué)專利中心 32203 | 代理人： | 劉海霞 |
| 地址： | 210094 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 膜蛋白 ycbm 表達(dá) 載體 及其 純化 方法 | ||
1.膜蛋白YcbM的表達(dá)載體，其特征在于，為表達(dá)質(zhì)粒pLy077-YcbM，核苷酸序列如SEQID NO.2所示，包含：噬菌體T7啟動(dòng)子；大腸桿菌核糖體結(jié)合位點(diǎn)，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大腸桿菌膜蛋白YcbM序列以及BamHI位點(diǎn)GGATCC；煙草蝕紋病毒半胱氨酸蛋白酶切割位點(diǎn)GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位點(diǎn)CATATG；超折疊維納斯熒光蛋白編碼序列；XhoI酶切位點(diǎn)CTCGAG；6個(gè)組氨酸位點(diǎn)以及終止密碼子TAG。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膜蛋白YcbM的表達(dá)載體的表達(dá)純化方法，其特征在于，具體步驟如下：
步驟1，大腸桿菌膜蛋白YcbM表達(dá)載體突變株的制備：將膜蛋白YcbM的表達(dá)載體即表達(dá)質(zhì)粒pLy077-YcbM轉(zhuǎn)化到宿主大腸桿菌中，并涂布于含抗生素以及0.1mM IPTG瓊脂平板，挑選黃綠色的陽性單克隆菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和誘導(dǎo)表達(dá)；
步驟2，將挑選的突變菌株轉(zhuǎn)化株接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并用1mM IPTG大規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)膜蛋白YcbM。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)純化方法，其特征在于，步驟1中，所述的大腸桿菌為大腸桿菌DH5α或大腸桿菌BL21(DE3)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)純化方法，其特征在于，步驟2中，所述的培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基或TB培養(yǎng)基。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于南京理工大學(xué)，未經(jīng)南京理工大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010049434.6/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- RNAi轉(zhuǎn)染子的改良選擇方法
- 雙控雙調(diào)節(jié)原核表達(dá)載體系統(tǒng)及其構(gòu)建方法和用途
- 表達(dá)載體組織、新的生產(chǎn)用細(xì)胞產(chǎn)生方法及其在重組產(chǎn)生多肽中的用途
- 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)人淀粉樣Aeta蛋白及純化的方法
- 一種智能表達(dá)式解析平臺(tái)及方法
- 一種復(fù)合表達(dá)式解析方法及系統(tǒng)
- 一種制備N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶的方法
- 定制生成表達(dá)式方法及裝置
- 文本的表達(dá)方法、裝置、電子設(shè)備及可讀存儲(chǔ)介質(zhì)
- 基因表達(dá)調(diào)節(jié)DNA，表達(dá)盒，表達(dá)載體
