[發(fā)明專利]一種靈芝菌絲體降壓肽及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010047485.5
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111363006B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉高強;伍強;王永紅;王曉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 中南林業(yè)科技大學
• 主分類號: C07K5/083
• 分類號: C07K5/083;C12N1/14;C12N15/31;A01H15/00;C12P21/02;A61K38/06;A61K36/074;A61P9/12;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

本發(fā)明公開一種靈芝菌絲體降壓肽及其制備方法，屬于多肽生物技術(shù)及降血壓藥物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的降壓肽，具有良好的體內(nèi)外降血壓活性，以及分子量低、易被人體吸收的特點，可作為保健食品添加劑或降血壓藥物；本發(fā)明的靈芝菌株SCIM 1006，是能產(chǎn)降壓肽Ser?Tyr?Pro的中國靈芝菌絲體，其通過在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加外源氨基酸并聯(lián)合低溫低轉(zhuǎn)速發(fā)酵技術(shù)，其天然多肽產(chǎn)量提高至1.52g/L；同時本發(fā)明的降壓肽提取純化方法，操作簡單，快速方便，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種靈芝菌絲體降壓肽及其制備方法，屬于多肽生物技術(shù)及降血壓藥物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

高血壓是威脅人類健康的主要疾病之一，是一種生活中常見的心腦血管疾病。隨著現(xiàn)代社會的發(fā)展和人民生活水平的提高，高血壓心腦血管疾病發(fā)病率大大增加，愈趨于年輕化。據(jù)《2018世界衛(wèi)生統(tǒng)計報告》統(tǒng)計顯示，在非傳染性疾病中心腦血管疾病死亡率居首，死亡人數(shù)達1790萬，而我國高血壓患者已累計超過3億人。然而，公認的卡托普利、雷米普利、賴諾普利等降血壓合成藥物，在臨床應(yīng)用過程中存在疲乏惡心、劇烈咳嗽、皮疹瘙癢等副作用。因此，亟待尋求相對安全高效、無毒副作用的降血壓藥物。近年來，來源于食物蛋白降解產(chǎn)物的活性肽以其高效安全、人體易吸收等優(yōu)點倍受關(guān)注。

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin I converting enzyme，ACE)屬血管內(nèi)皮細胞膜結(jié)合酶，它催化血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ?qū)е卵獕荷撸侵委煾哐獕旱睦硐氚悬c。ACE抑制肽是一類具有潛在降血壓功效的小分子物質(zhì)，可抑制ACE酶活，降低舒緩激肽的破壞和減少血管緊張素I的降解。國內(nèi)外相繼從動物制品、海洋生物、植物(Seung,etal.Antihypertensive peptides from animal products,marine organisms,and plans-a review.Food chemistry,2017,228:506-517)中獲得ACE抑制肽，雖在體外具有很強的ACE抑制活性，但并不能說明其能在體內(nèi)發(fā)揮降血壓功效，且ACE抑制肽的降血壓分子機制并不清楚。此外，現(xiàn)在普遍采用定向酶解技術(shù)，對食物來源蛋白進行降解以制備ACE抑制肽。然而，定向酶解技術(shù)所獲得的酶解產(chǎn)物成分相對復(fù)雜，后續(xù)純化困難；酶解過程需嚴格控制蛋白酶的酶解條件(加酶量、溫度及pH等)，將消耗更多“物力+能源+人力”，生產(chǎn)成本大，因而制約了ACE抑制肽規(guī)模化生產(chǎn)的發(fā)展。目前，國外少數(shù)研究者已從傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)天然的ACE抑制肽，開辟了利用微生物制備天然ACE抑制肽的新思路。

目前報道的ACE抑制肽，包括墨魚肌肉蛋白Val-Glu-Leu-Tyr-Pro、雞蛋His-Leu-Phe-Gly-Pro-Pro-Gly-Lys-Lys-Asp-Pro-Val、蠶蛹Gly-Ala-Met-Val-Val-His、花生Tyr-Leu-Val-Arg等不同來源的肽類物質(zhì)，分子量大小不一，通常由4-12氨基酸殘基組成，雖在體外具有較強的ACE抑制活性，但大部分研究者并未對其體內(nèi)降血壓功效進行驗證，體內(nèi)降血壓機制尚不明確。

靈芝屬真菌，藥理價值極高，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、保肝降壓等多種功效。三萜類化合物和多糖是靈芝的兩大主要活性成分，而有關(guān)靈芝活性寡肽的報道甚少。靈芝子實體栽培周期較長(4～9個月)，易受季節(jié)與環(huán)境的影響，因而子實體活性物質(zhì)生物穩(wěn)定性較差，而通過分離靈芝細胞并利用液態(tài)發(fā)酵技術(shù)，制備靈芝菌絲體來獲取活性物質(zhì)是更為有效的手段。因此，將靈芝菌絲體作為一種制備活性肽的新資源進行開發(fā)利用具有重要的現(xiàn)實意義。在前期研究過程中，發(fā)明人團隊從靈芝菌絲體中獲得了3種ACE抑制肽，其氨基酸序列分別為Gln-Leu-Asp-Leu、Gln-Leu-Val-Pro和Gln-Asp-Val-Leu，測得其抑制ACE的IC50分別為21.0μmol/L、24.6μmol/L和23.8μmol/L。但是，仍然很有必要開發(fā)更多的具有ACE抑制的肽，以及活性更好的ACE抑制肽。

發(fā)明內(nèi)容