[發明專利]基于離心法的液基制片技術用于液基真菌的檢測方法

在審

• 申請號: 202010047393.7
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111238890A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 張沿;熊文芳;呂正和;陳永洪;杜厚明;楊平平;李娟;陳榮平
• 申請（專利權）人: 江西業力醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/64
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 龔家驊

本發明提出了一種基于離心法的液基制片技術用于液基真菌的檢測方法，所述基于離心法的液基制片技術包括以下步驟：向含有真菌的標本的標本瓶內加入專用消化液，將瓶底呈倒錐體形的標本瓶放入振蕩器振蕩，靜置，尖端朝下，比重較大的真菌沉淀于尖底部，振蕩后用一次性移液管插入標本瓶底部，吸取1?2mL標本，加入至制片倉內，制片倉安裝在裝有載玻片的制片架上，將制片架懸掛入離心式液基細胞制片機內，離心，制成液基薄片。本發明制備方法簡單，制得的真菌薄片清晰可觀察，實現對真菌的精確檢測，有效的解決了現有技術中所存在的操作繁瑣、過程耗時長，所需試劑多等問題。

技術領域

本發明涉及醫學化驗技術領域，具體涉及一種基于離心法的液基制片技術用于液基真菌的檢測方法。

背景技術

真菌屬于真核生物，沒有質體，營養方式為吸收，無吞噬作用。細胞壁含有甲殼質和β-葡聚糖。可引起人類，動物的疾病，稱為真菌病，還可引起植物的疾病、人類過敏性疾病和真菌毒素中毒癥。真菌侵犯人體常繼發于其他疾患，如惡性腫瘤、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X線照射；免疫抑制劑等導致免疫功能和抵抗力低下；大量應用腎上腺皮質激素的病人，其炎癥反應多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、導管插管、放療等應用引起局部組織損傷，為真菌的入侵提供了條件。近年來由于免疫缺陷病毒感染者的不斷出現，使原來不致病的真菌轉為致病真菌。因此，真菌感染已經成為一個日益嚴峻的問題。

真菌分為淺部真菌和深部真菌。淺部真菌：主要侵犯機體皮膚，寄生和腐生于表皮，毛發和甲板的角質組織中，引起淺部真菌病，簡稱癬病。臨床最多見的淺部真菌病有：體癬、股癬、手癬和足癬。

真菌感染在常用的檢測方法包括：直接鏡檢法(如KOH涂片或乳酸酚棉藍涂片)及染色鏡檢法。其中，直接鏡檢法缺點在于陽性率較低，陰性結果也不能排除診斷，背景雜亂，靈敏度低，漏檢率高，對操作人員專業識別能力要求高。一般的染色鏡檢法包括：革蘭染色、吉姆薩染色、PAS法、六胺銀法(GMS)、銀氨液浸染法(G-S)、Gridley染色法、粘蛋白卡紅(Mayer’s Mucicarmin stain)染色法、巴氏染色法等。這幾種特殊染色法優點：在控制好染色細節的前提下，可染出漂亮的真菌形態，容易辨識。

發明內容

本發明提供一種基于離心法的液基制片技術用于液基真菌的檢測方法，其目的在于，制備方法簡單，制得的真菌薄片清晰可觀察，實現對真菌的精確檢測，有效的解決了現有技術中所存在的操作繁瑣、過程耗時長，所需試劑多等問題。

本發明提供一種基于離心法的液基制片技術用于液基真菌的檢測方法，所述基于離心法的液基制片技術包括以下步驟：向含有真菌的標本的標本瓶內加入專用消化液，將瓶底呈倒錐體形的標本瓶放入振蕩器振蕩，靜置，尖端朝下，比重較大的真菌沉淀于尖底部，振蕩后用一次性移液管插入標本瓶底部，吸取1-2mL標本，加入至制片倉內，制片倉安裝在裝有載玻片的制片架上，將制片架懸掛入離心式液基細胞制片機內，離心，制成液基薄片；

所述專用消化液由以下原料制備而成：pH為8的PBS緩沖液、胰蛋白酶、EDTA二鈉、碳酸氫鈉和二硫蘇糖醇；

所述專用消化液的制備方法：將胰蛋白酶、EDTA二鈉、二硫蘇糖醇溶于pH為8的PBS緩沖液中，加入碳酸氫鈉調節pH為8.3，攪拌溶解，制得專用消化液。

作為本發明進一步的改進，所述專用消化液由以下原料按重量份制備而成：pH為8的PBS緩沖液1000-1200份、胰蛋白酶30-100份、EDTA二鈉10-30份、碳酸氫鈉適量和二硫蘇糖醇10-20份。

作為本發明進一步的改進，所述專用消化液由以下原料按重量份制備而成：pH為8的PBS緩沖液1100份、胰蛋白酶70份、EDTA二鈉20份、碳酸氫鈉適量和二硫蘇糖醇15份。

作為本發明進一步的改進，所述標本和專用消化液的體積比為1:1。