[發明專利]一種RHD-S68R突變體及其檢測方法

有效

• 申請號: 202010047036.0
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111154766B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 王學東;邵超鵬;王玥蘋;周道平;姬艷麗;馬靜
• 申請（專利權）人: 安徽省第二人民醫院（安徽醫學高等?？茖W校附屬醫院;安徽省職業病防治院）
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/6888;C07K14/47;C12N15/11
• 代理公司: 無錫松禾知識產權代理事務所(普通合伙) 32316
• 代理人: 朱亮淞

本發明公開了一種RHD?S68R突變體及其檢測，野生型的RHD基因如SEQ?ID?NO：1所示，突變型的RHD基因如SEQ?ID?NO：2所示；突變型的RHD基因如SEQ?ID?NO：2所示；突變型的RHD基因與野生型的RHD基因相比，在基因序列的第110位由堿基T突變為堿基G；用于檢測上述突變型的特異性引物，其上游引物序列如SEQ?ID?NO:3所示，下游引物序列如SEQ?ID?NO:4所示。本發明所述的一種RHD?S68R突變體及其檢測，能夠快速準確地檢測摻雜于基因庫中突變基因的有無。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，尤其涉及一種RHD-S68R突變體及其檢測。

背景技術

Rh血型是人類紅細胞血型系統中最為復雜、最具多態性的系統，也是引起臨床輸血反應和嚴重新生兒溶血病的主要紅細胞血型。目前已發現50多種Rh血型抗原，其中RhD抗原具有很強的免疫原性，是由RHD基因編碼產生，是血型研究的重點。臨床上根據紅細胞膜表面是否檢測到D抗原，將Rh血型抗原分為RhD陽性和RhD陰性兩大類。

目前，Rh血型D抗原的常規檢測方法是采用血清學鹽水法和間接抗人球蛋白試驗以及吸收試驗進行鑒定。但是血清學技術存在一定的局限性。由于疾病或其他因素的影響，某些個體的紅細胞在血清學定型時結果難以判定；慢性長期輸血患者血清學結果有時呈現“混合視野”的現象；當無法獲得樣本的紅細胞或紅細胞樣本不足時，像胎兒血型鑒定、法醫鑒定遺留物等，血清學檢測也不能獲得正確結果。

用免疫血清學的方法對RhD血型的檢測主要依賴于抗-D抗體的特異性和抗原表達量。目前隨著分子生物技術的發展，RhD突變體逐年增加，其抗原表達量和基因突變位點各有差異。這些基因突變體的檢測主要通過分子生物學方法確定Rh血型D抗原基因型，不僅在彌補血清學技術的不足上具有重要的臨床實用意義，而且還具有廣泛的科研應用價值。

發明內容

發明目的：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供一種RhD血型抗原RHD-S68R突變體RHD204TG等位基因及其檢測方法，以快速準確地檢測摻雜于基因庫中突變基因的有無。

技術方案：為實現上述目的，本發明的一種RhD血型抗原RHD-S68R突變體RHD204TG等位基因，野生型的RHD基因如SEQ?ID?NO：1所示，突變型的RHD基因如SEQ?ID?NO：2所示；突變型的RHD基因與野生型的RHD基因相比，在基因序列的第110位由堿基T突變為堿基G；由野生型的RHD基因編碼后的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：5所示，由突變型的RHD基因編碼后的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：6所示，突變型的RHD基因編碼后的氨基酸序列與野生型的RHD基因編碼后的氨基酸序列相比，在其氨基酸序列的第68位由絲氨酸S轉變為精氨酸R。

一種用于檢測所述RhD血型抗原RHD-S68R突變體RHD204TG等位基因的特異性引物，其特征在于：特異性引物的上游引物序列如SEQ?ID?NO:3所示，下游引物序列如SEQ?IDNO:4所示。

本發明的有益效果如下所述：一種RHD-S68R突變體及其檢測，采用分子生物學方法進行基因水平的檢測，可以高靈敏且高精度檢測摻雜于基因庫中突變基因的有無；由于不同民族間存在RHD基因的差異，根據中國人的RHD基因分子背景，專門針對在中國人中新發現的RHD204TG等位基因而設計的。本發明不僅在彌補血清學技術的不足上具有重要的臨床實用意義，而且還具有廣泛的科研應用價值。

附圖說明

附圖1為所述實施例中RHD204TG等位基因檢測的凝膠電泳圖；

附圖2為所述實施例中RHD204TG等位基因突變測序圖。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明作更進一步的說明。