[發明專利]PCSK9抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010043385.5
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111171152B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 蔡建輝;王會巖;董媛;尹茉莉;唐祿;徐淞;王江明;李斌;胡川閩
• 申請（專利權）人: 吉林醫藥學院
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;G01N33/573
• 代理公司: 石家莊科誠專利事務所(普通合伙) 13113
• 代理人: 張紅衛

本發明涉及一種PCSK9抗體及其制備方法和應用，具體是提供用于人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9定量檢測的配對單克隆抗體，該抗PCSK9單克隆抗體可特異性的與PCSK9反應，并可以應用于熒光免疫層析對人血清中PCSK9含量進行精確測定，其檢測結果與總膽固醇有很好的相關性，R2＝0.9619，具有很高的靈敏度，其分析靈敏度約為52.15ng/ml。配對的單克隆抗體可以擴展應用至其他基于抗原抗體反應的免疫學檢測技術，包括酶聯免疫、膠體金、化學發光定量檢測等，與多克隆抗體相比，單克隆抗體具有穩定性好、易于標準化的優點，更適合用來建立商品化的標準檢測方法。

技術領域

本申請涉及生物檢測以及抗體制備技術領域，具體涉及PCSK9抗體的制備和應用，尤其涉及一種用于PCSK9定量檢測的配對抗體的制備方法、應用及其核苷酸序列。

背景技術

心血管疾病(cardiovascular?disease，CVD)是當今世界上危害人類健康最為嚴重的疾病之一，業內普遍認為，血液中的低密度脂蛋白(low?density?lipoprotein，LDL)水平升高會導致動脈粥樣硬化，是心血管疾病主要的罪魁禍首。

人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9(proprotein?convertase?subtilisin?kexin?type9，PCSK9)是一種分泌性絲氨酸蛋白酶，被認為是LDL代謝的重要調節因子，是FH和CVD的潛在治療靶點。PCSK9是前蛋白轉化酶家族的一員，主要表達于肝、腸、腎和中樞神經系統。PCSK9由前體結構域、催化結構域和C端結構域組成，其中后者富含半胱氨酸和組氨酸。轉錄后，PCSK9?mRNA進入內質網并翻譯表達一個分子量為74kD的前蛋白。前蛋白在高爾基體中裂解為分子量為20kD原結構域和63kD成熟結構域。前體結構域與催化結構域非共價連接，抑制PCSK9的自催化作用。

PCSK9通過下調肝細胞表面的低密度脂蛋白受體(LDL?receptor，LDL-R)，對LDL-C的降解和脂質代謝的調節起著重要作用。PCSK9的催化結構域與LDL-R的表皮生長因子A結構域結合形成配體-受體復合物。復合物被包裹進入細胞質并轉移到溶酶體中，在溶酶體中LDL-R被降解。結果，血液中的LDL清除率降低，血液LDL-C水平升高。

經過大量研究表明，高膽固醇血癥患者的血清PCSK9水平顯著升高，因此，血清PCSK9含量的檢測是PCSK9抑制劑藥物使用前必須檢測的臨床指標。同時，研究還發現血清PCSK9水平升高與年齡、TC、TG、LDL-C等動脈粥樣硬化危險因素也有著十分密切的關系，因此血清PCSK9水平也是診斷冠心病的重要標準。

發明內容

鑒于現有技術中尚無針對PCSK9的定量檢測方法的問題，本發明提供一種PCSK9抗體及其制備方法和應用，本發明建立了針對PCSK9的熒光免疫層析檢測方法并以此成功建立了定量檢測人PCSK9的熒光免疫層析檢測方法，從而可以實現PCSK9快速定量檢測，滿足了市場的需要。

本發明的目的在于提供了用于PCSK9定量檢測的配對抗體及其核苷酸序列。

本申請的一方面提供PCSK9抗體，所述PCSK9抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:8。

在根據本發明的一個實施方案中，所述PCSK9抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2或SEQ?ID?NO:6。

在根據本發明的一個實施方案中，所述PCSK9抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4，輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2；

或者，所述PCSK9抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:8，輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:6。

本發明還提供了一種編碼PCSK9抗體的重鏈可變區的核苷酸序列，所述核苷酸序列為SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:7。