[發明專利]副溶血弧菌的核酸快速恒溫檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202010042446.6
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN111057780B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 曹永梅;李園園;李雪玲;韋朝春;賈犇;劉偉;陸長德;李亦學
• 申請（專利權）人: 上海旺旺食品集團有限公司;上海產業技術研究院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種針對副溶血弧菌的恒溫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括能擴增副溶血弧菌基因組特異性堿基序列的引物組；

其中，所述能擴增副溶血弧菌基因組特異性堿基序列的引物組選自以下引物組A、B、A’、B’之任意一組；

引物組A：

上游外引物F3_A：5’- TGAGTAGCGGTTCAATCG -3’（SEQ ID NO：1）；

下游外引物B3_A：5’- CGAGAAGTAAGGAAGTCTCT -3’（SEQ ID NO：2）；

上游內引物FIP_A：5’- CAAACTAACGCTTATAACCAACAGCATAGTTTTTCAGCTCGGC -3’（SEQID NO：3）；

下游內引物BIP_A：5’- ACATCATACCTAGTGCAATGGTGACCATAAGAAAGCGACTGTA -3’（SEQID NO：4）；

引物組B：

上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’（SEQ ID NO：6）；

上游內引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’（SEQID NO：7）；

下游內引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’（SEQ IDNO：8）；

引物組A’：

上游外引物F3_A：5’- TGAGTAGCGGTTCAATCG -3’；

下游外引物B3_A：5’- CGAGAAGTAAGGAAGTCTCT -3’；

上游內引物FIP_A：5’- CAAACTAACGCTTATAACCAACAGCATAGTTTTTCAGCTCGGC -3’；

下游內引物BIP_A：5’- ACATCATACCTAGTGCAATGGTGACCATAAGAAAGCGACTGTA -3’；

上游環引物LF_A：5’- ATTGATCAGACCCACACCAC -3’（SEQ ID NO：17）；

引物組B’：

上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’；

下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’；

上游內引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’；

下游內引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’；

下游環引物LB_B：5’- AGAAGTACTGGAAATGCACGAT -3’（SEQ ID NO：18）。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，其還包括Bst DNA聚合酶反應緩沖液、BstDNA聚合酶、dNTP 溶液、Mg²⁺、甜菜堿中的一種或多種。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的酶反應體系包括：1× BstDNA聚合酶反應緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3μmol/L的F3和B3引物，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LF或LB引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，和0-1.5mol/L的甜菜堿。

4.如權利要求1~3之任一項所述的試劑盒在非診斷目的的恒溫檢測副溶血弧菌中的應用。