[發(fā)明專(zhuān)利]血清中維生素D代謝物-25（OH）D3的提取方法及檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010041949.1
• 申請(qǐng)日: 2020-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111198237A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅強(qiáng);謝利德;程亞美;丁浩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州康吉診斷試劑有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州漢東知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32422
• 代理人: 葛娟

本發(fā)明公開(kāi)了一種血清中維生素D代謝物?25（OH）D3的提取方法及檢測(cè)方法，該提取方法包括：1）使25（OH）D3從沉淀蛋白中釋放出，再瞬離至少一次，從而獲得含有25（OH）D3、磷脂和蛋白質(zhì)的混合物樣品；2）利用硅藻土萃取板至少吸附混合物樣品中的磷脂和蛋白質(zhì)；3）對(duì)硅藻土萃取板進(jìn)行洗脫，然后壓合硅藻土萃取板和收集板從而收集含有25（OH）D3的洗脫液；4）吹干收集板，并復(fù)溶維生素D；該檢測(cè)方法包括將血清中維生素D代謝物?25（OH）D3的提取方法所獲的25（OH）D3的復(fù)溶液作為待檢測(cè)物；將待檢測(cè)物上樣至液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)。本發(fā)明提供的提取方法即萃取方法,可同時(shí)完成樣品富集與凈化，萃取率更高,能夠大大提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生化檢測(cè)方法，特別涉及一種血清中維生素D代謝物-25（OH）D3的提取方法及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

維生素D(vitaminD)為脂溶性的固醇類(lèi)物質(zhì)，簡(jiǎn)稱(chēng)VD，目前認(rèn)為維生素D也是一種類(lèi)固醇激素，維生素D家族成員中最重要的成員是VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇)。VD2和VD3在化學(xué)結(jié)構(gòu)上存在側(cè)鏈不同的差異，尚無(wú)明確證據(jù)證明兩者生理功能存在不同。自然界中含維生素D的天然食物不多，野生鮭魚(yú)和經(jīng)紫外線照射的蘑菇中含有VD。VD也可以通過(guò)VD強(qiáng)化食物攝入，最常見(jiàn)VD強(qiáng)化食物是牛奶，其次還包括一些谷物、果汁和人造黃油等。

在VD代謝過(guò)程中，VD前體物分別以7-脫氫膽固醇(7-Dehydrocholestero1)和麥角固醇的形式，存在于所有陸地脊椎動(dòng)物(包括人類(lèi))的皮膚和植物中，經(jīng)日光中高能量的B型紫外光照射激發(fā)后轉(zhuǎn)化為VD，進(jìn)而在人或動(dòng)物肝臟和腎臟VD羥化酶的催化下先后形成25羥基維生素D(25（OH）D3)和l，25二羥維生素D(1,25[OH]2D)。而1,25(OH)2D是在體內(nèi)產(chǎn)生生物學(xué)作用的活性形式，因而又稱(chēng)之為活性VD。1,25二羥維生素D的合成受血清鈣、磷濃度和甲狀旁腺素(Parathyroidhormone-PTH)的調(diào)節(jié)。當(dāng)血鈣濃度降低時(shí)，刺激甲狀旁腺分泌甲狀旁腺素，同時(shí)增強(qiáng)腎臟lα羥化酶的活性，使活性VD合成增加。后者又通過(guò)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制抑制甲狀旁腺素的分泌。形成VD和鈣磷代謝的協(xié)調(diào)機(jī)制。除此之外，大量觀察性研究數(shù)據(jù)支持血清中的25（OH）D3水平與慢性代謝性疾病、心血管疾病和腫瘤的發(fā)生均相關(guān)，因此維生素D的骨骼外作用引起了很大的關(guān)注。

針對(duì)中國(guó)成人骨骼健康，推薦維生素D參考值采用美國(guó)健康研究院、英國(guó)骨質(zhì)疏松學(xué)會(huì)和澳大利亞骨質(zhì)疏松學(xué)會(huì)（OsteoporosisAustralia）的標(biāo)準(zhǔn)，即25（OH）D3≥50nmol/L并且≤150nmol/L，可以認(rèn)為維生素D足夠；

中國(guó)是一個(gè)幅員遼闊的多民族國(guó)家，近年來(lái)對(duì)維生素D狀況逐漸關(guān)注，有不同地區(qū)和人群的維生素D狀況報(bào)道，結(jié)果顯示很大差異。可以發(fā)現(xiàn)，中國(guó)人群中維生素D缺乏癥普遍存在，即使在日光充沛的南方地區(qū)也是如此；同時(shí)，老年人和孕婦是維生素D缺乏癥高危人群。如果采用25（OH）D350nmol/L（20ng/mL）定義維生素D缺乏癥，多數(shù)地區(qū)報(bào)道維生素D缺乏癥發(fā)生率高于60%；如果采用25（OH）D375nmol/L（30ng/mL）定義維生素D缺乏癥，則多數(shù)地區(qū)報(bào)道維生素D缺乏癥發(fā)生率高于90%。

維生素D的推薦補(bǔ)充劑量和耐受上限隨著年齡和特定環(huán)境的差異而不同，可采用日劑量、周劑量、月劑量或者每4個(gè)月一次口服以維持維生素D。

對(duì)于孕期婦女而言，25（OH）D3通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液。由于25（OH）D3半衰期為2-3周，因此在母體25（OH）D3充足的情況下，胎兒出生后幾周內(nèi)維生素D水平將會(huì)維持在一個(gè)正常水平內(nèi)。但是很多研究表明大多數(shù)孕婦和新生兒存在維生素D缺乏，孕期以2000-4000IU/d劑量補(bǔ)充維生素D可改善孕婦及新生兒的25（OH）D3水平。