[發(fā)明專利]一種磁性DNA隔室封裝雙酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010040677.3
• 申請(qǐng)日: 2020-01-15
• 公開（公告）號(hào): CN111154749B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊屹;宋佳一;蘇萍;沈昊;周梓昕;賀雯婷;李夢(mèng)琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

1.一種磁性?DNA?隔室封裝雙酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將單鏈?DNA?ssDNA1，單鏈?DNA?ssDNA2?和單鏈?DNA?ssDNA3?溶于緩沖溶液中，混合溶液在?95?°C?反應(yīng)?5?min，反應(yīng)后的混合溶液室溫冷卻?2?h?制備?Y-型?DNA結(jié)構(gòu)；采用ssDNA?L1?對(duì)葡萄糖氧化酶（GOx）進(jìn)行修飾以及?ssDNA?L2?對(duì)辣根過氧化物酶（HRP）進(jìn)行修飾分別制備?ssDNA?L1-GOx?和?ssDNA?L2-HRP；

（2）將（1）中合成的?Y-型?DNA?結(jié)構(gòu)與?ssDNA?L?功能化的磁性納米粒子、ssDNA?L1-GOx?和?ssDNA?L2-HRP?混合，混合液在?37?^oC?下反應(yīng)?3?h，合成磁性?DNA?隔室封裝雙酶體系；ssDNA?L?功能化的磁性納米粒子、ssDNA?L1-GOx?和?ssDNA?L2-HRP?的摩爾比為?1:1:1，ssDNA?L1-GOx?和?Y-型?DNA?結(jié)構(gòu)的摩爾比為?3:1，ssDNA?L1?和?GOx的摩爾比為?1:1，ssDNA?L2?和?HRP?的摩爾比為?1:1；

步驟（1）中?ssDNA1，ssDNA2?和?ssDNA3?濃度均為?100?μM；

步驟（1）中所述的?ssDNA1?的序列為?5’-?CACGCTGTCCTAACCATGACCGTCGAAGCGATTGACTCTC-3’，ssDNA2?的序列為?5’-?CTTCGACGGTCATGTACTAGATCAGAGGCGATTGACTCTC-3’，ssDNA3?的序列為?5’-?CCTCTGATCTAGTAGTTAGGACAGCGTGCGATTGACTCTC-3’，ssDNA?L1?的序列為?5’-SH-?TCTATTCGCATGAGAATTCCATTCACCGTAAGGAGAGTCAATCG，ssDNA?L2?序列的序列為?5’-SH-

CTTACGGTGAATGGAATTCTCATGCGAATAGAGAGAGTCAATCG；

步驟（2）中所述的?ssDNA?L?的序列為?NH₂-CGATTGACTCTC，混合緩沖液為?10?mM?NaCl，pH7.4；

步驟（2）中所述的磁性粒子為四氧化三鐵粒子，其表面由?3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）直接修飾。

2.根據(jù)權(quán)利要求?1?所述的磁性?DNA?隔室封裝雙酶的方法，其特征在于：步驟（1）中ssDNA1，ssDNA2?和?ssDNA3?為部分互補(bǔ)配對(duì)序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求?1?所述的磁性?DNA?隔室封裝雙酶的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的ssDNA?L1?和ssDNA?L2?為部分互補(bǔ)配對(duì)序列且ssDNA?L1?和ssDNA?L2?與酶連接的一端與?ssDNA1，ssDNA2?和?ssDNA3?的部分堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。