[發明專利]一種預防金黃色葡萄球菌和白色念珠菌感染的ATM融合蛋白的制備及應用

在審

• 申請號: 202010039924.8
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111138551A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 崔玉東;楊思宇
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/085;A61K39/00;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 大慶禹奧專利事務所 23208
• 代理人: 朱士文;楊曉梅

本發明涉及一種ATM融合蛋白，是在金黃色葡萄球菌MntC融合蛋白的氨基酸序列前用Linker連接了白色念珠菌Als3 T細胞表位的9個氨基酸，融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本發明選取Als3的T細胞表位與MntC蛋白融合，制備成重組ATM融合蛋白，并對其進行免疫原性研究，結果證實將Als3的T細胞表位與MntC蛋白融合后能誘導機體產生更好的抗S.aureus感染免疫應答和免疫保護作用，且Als3的T細胞表位明顯增強了MntC誘導的抗S.aureus菌感染免疫保護作用，同時融合蛋白ATM也具有一定的抗C.albicans感染作用，是制備抗S.aureus感染和C.albicans感染制劑的理想候選融合蛋白，即本發明的融合蛋白具有更好的免疫原性及誘導更機體產生強的免疫保護作用。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種預防金黃色葡萄球菌和白色念珠菌感染的ATM融合蛋白的制備及應用。

背景技術

金黃色葡萄球菌(S.aureus)是一種常見的人和動物均可感染的條件致病菌，常在鼻腔、皮膚和消化道內定殖，可引起人的皮膚和軟組織感染、敗血癥、心內膜炎和肺炎等多種病癥。S.aureus也是引起奶牛乳房炎的重要病原菌之一，可致使奶牛產奶量下降，牛奶品質低劣，嚴重影響畜牧業和奶業經濟效益。以往對S.aureus感染以抗生素治療為主，但是由于抗生素的長期應用和濫用，導致耐藥菌株大量出現。因此研究和使用疫苗來防治S.aureus感染備受重視。研究表明，細胞免疫應答尤其是CD4⁺T細胞分化產生的Th1和Th17細胞在抗S.aureus感染免疫中發揮重要作用。因此，研究和提高S.aureus抗原誘導機體細胞免疫應答能力具有重要意義和應用價值。

白色念珠菌(C.albicans)是寄生在人口腔、皮膚、呼吸道、腸道和生殖道的條件性致病菌，當環境變化及免疫能力降低時，引起反復的淺層感染和嚴重的系統感染。C.albicans也可引起犢牛、羔羊、禽以及犬貓等多種動物感染，特別是也可以引起奶牛乳房炎。隨著廣譜抗生素的廣泛使用以及免疫功能降低者不斷增多，C.albicans感染日漸增加，已成為人們關注和研究的重要疾病之一。抗C.albicans感染的免疫機制包括非特異性免疫應答、特異性細胞免疫應答和特異性體液免疫應答，其中特異性細胞免疫應答特別是Th1細胞和Th17細胞發揮極其重要作用。

如上所述，研究能夠誘導強烈細胞免疫應答和體液免疫應答、且同時抗S.aureus感染和C.albicans感染的免疫原具有重要的實際意義和應用價值。MntC是S.aureus獲取錳的關鍵蛋白，在S.aureus感染初期大量持續表達，它不僅表達在S.aureus表面，也表達在其他葡萄球菌表面。MntC作為S.aureus抗原能誘導小鼠產生強烈的體液免疫應答和一定的細胞免疫應答，并通過特異性抗體、Th1細胞和Th17細胞發揮抗S.aureus感染的免疫保護作用。Als3是白色念珠菌(C.albicans)的粘附因子，能夠誘導機體產生細胞免疫應答并對S.aureus感染具有交叉免疫保護作用。研究表明，在Als3蛋白中存在著一個T細胞表位，能夠誘導機體產生良好的Th1和Th17細胞免疫應答。因此，為進一步提高MntC誘導細胞免疫應答能力，進而提高MntC誘導的抗葡萄球菌感染免疫保護作用，同時能夠一定程度地發揮抗C.albicans感染作用，我們將S.aureus MntC蛋白與C.albicans Als3的T細胞表位進行串聯融合表達，獲得融合蛋白ATM，并將ATM制備成免疫原免疫接種小鼠。研究證明，Als3的T細胞表位明顯增強了MntC誘導的抗金黃色葡萄球菌感染免疫保護作用，且ATM也誘導機體產生一定的抗白色念珠菌感染的能力。

發明內容

本發明的第一目的是提供一種ATM融合蛋白，將S.aureus MntC蛋白與C.albicansAls3的T細胞表位進行融合表達而成，以達到免疫接種后能更好地抗S.aureus感染和一定程度地抗C.albicans感染的能力。

本發明的第二目的是提供上述ATM融合蛋白的編碼基因。