[發明專利]一種基于光子晶體的外泌體多元檢測方法

有效

• 申請號: 202010039641.3
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111157504B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 陳寶安;馬曉燕;欒成欣;吳雪;周芳;張靜
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 冒艷

本發明公開了一種基于光子晶體的外泌體多元檢測方法，基于核殼式光子晶體材料，通過在其表面修飾不同的腫瘤特異性適配體，實現對不同腫瘤來源的外泌體亞群多元檢測，最終通過CD63適配體的雙重識別及雜交鏈式反應得到放大的熒光，進而對外泌體進行檢測。該方法具有穩定性好、準確、高效、節省時間、避免重復勞動等優點。

技術領域

本發明涉及外泌體的檢測方法，特別涉及一種基于光子晶體的外泌體多元檢測方法。

背景技術

外泌體是細胞分泌的一類膜性囊泡，大小在30-150nm之間，可由體內多種細胞分泌并穩定存在于在體液循環中。外泌體外部有磷脂雙分子層保護，內部攜帶由來自親本細胞的多種生物大分子，包括蛋白質、脂質和核酸分子等，攜帶由親本細胞的大量信息，是細胞間通訊的重要運載體。研究證明外泌體在促進腫瘤生長與轉移過程中起重要作用，在腫瘤診斷和治療領域研究價值巨大。尤其在臨床診斷領域，表達腫瘤特異性標志物的腫瘤來源外泌體亞群作為腫瘤液體活檢生物標志物具有廣泛應用前景。目前外泌體檢測方法多耗時耗力，多依賴于昂貴的儀器，難以實現同時對多種外泌體亞群進行檢測。

光子晶體是一種特殊的納米材料，周期性的納米結構賦予它穩定的反射峰及結構色。其中以功能性水凝膠構建的核殼式結構因其編碼穩定、及較大的比表面積、易修飾等優點，在生物檢測分析方面逐漸顯現出巨大的潛力。適配體是一小段經體外篩選得到的寡核苷酸序列，能與相應的配體進行高親和力和強特異性的結合，相較于基于抗體的免疫檢測方法，適配體作為一種新型的分子識別元件，具有更多的優勢：親和力高、特異性強、制備方便、穩定性好。結合上述兩者的優點，我們構建出一種外泌體多元檢測的新方法。

發明內容

發明目的：本發明目的是提供基于光子晶體的外泌體多元檢測方法。

技術方案：本發明提供一種基于光子晶體的外泌體多元檢測方法，首先在活化后的核殼式光子晶體材料表面修飾不同的腫瘤特異性適配體，實現對不同腫瘤來源的外泌體亞群多元檢測，與外泌體溶液共同孵育后，利用CD63適配體進行雙重識別及雜交核酸鏈式反應得到放大的熒光。所述的雙重識別一是指腫瘤特異性適配體特異性識別腫瘤來源外泌體表面的特異性蛋白比如epcam，一是CD63適配體識別外泌體的四跨膜蛋白之一的cd63。

進一步地，所述核殼式光子晶體材料的制備方法，包括如下步驟：

(1)制備光子晶體微球模板：單分散的膠體晶體納米粒子加去離子水稀釋形成膠體溶液，用微流控裝置剪切成單分散的液滴，固化液滴模板，清洗，煅燒之后，即可；

(2)制備核殼式光子晶體水凝膠微球：將光子晶體微球投入水凝膠聚合前體溶液中，固化后將水凝膠浸泡在去離子水中，根據微球內外不同的膨脹程度從水凝膠中剝離光子晶體微球，通過腐蝕得到核殼式光子晶體材料。

進一步地，所述步驟(1)中膠體晶體納米粒子為二氧化硅膠體粒子、二氧化鈦膠體粒子或聚苯乙烯類聚合物溶液。

進一步地，所述步驟(2)中水凝膠聚合前體溶液為聚乙二醇雙丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯明膠或丙烯酸中的一種或幾種的混合。

進一步地，所述步驟(2)中腐蝕所用的腐蝕劑是氫氟酸或氫氧化鈉。

進一步地，所述腫瘤特異性適配體為Epcam適配體、PSMA適配體、MUC-1適配體或AS1411適配體。

進一步地，所述CD63適配體有一段能夠觸發雜交鏈式反應的序列，所述序列為SEQID NO.1：

5’-caccccacctcgctcccgtgacactaatgctat ttt ttt aaccctaaccct-3’。