[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用釀酒酵母S.cerevisiae L5267發(fā)酵生產(chǎn)谷胱甘肽的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010039445.6
• 申請(qǐng)日: 2020-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110923158A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王成忠;郭穎梅;趙曉紅;任振峰;王少華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 齊魯工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/18
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/18;C12P21/02;C07K5/037;C07K1/14;C07K1/34;C12R1/865
• 代理公司: 青島高曉專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張清東

1.一種利用釀酒酵母S.cerevisiae L5267發(fā)酵生產(chǎn)谷胱甘肽的方法。步驟如下：

(1)使用接種針從斜面培養(yǎng)基中挑取釀酒酵母S.cerevisiae L5267轉(zhuǎn)于種子培養(yǎng)基中。(2)對(duì)釀酒酵母S.cerevisiae L5267進(jìn)行擴(kuò)培，擴(kuò)培條件：搖床溫度28～32℃、轉(zhuǎn)速120r/min，pH自然，振蕩培養(yǎng)38～46h，培養(yǎng)完畢后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，調(diào)整釀酒酵母S.cerevisiae L5267數(shù)量級(jí)為5×10⁸～8×10⁸cfu/ml。(3)發(fā)酵過(guò)程:將步驟(2）中擴(kuò)培后的釀酒酵母接入到培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵條件：裝液量為55～60mL，接種量為5.0～8.0%，培養(yǎng)溫度為27～30℃，轉(zhuǎn)速為130～150 r/min，培養(yǎng)時(shí)間 42～48h，培養(yǎng)完成后即為發(fā)酵液待用。(4)將步驟（3）所制得的發(fā)酵液旋蒸濃縮，采用微珠渦流法進(jìn)行細(xì)胞破碎，選用微珠直徑為0.4～0.5mm，渦流震動(dòng)頻率為3000r/min，在破胞管中進(jìn)行細(xì)胞破碎,得處理后的發(fā)酵液。(5) 反膠團(tuán)萃取處理后的發(fā)酵液，納濾脫鹽，真空冷凍干燥，谷胱甘肽產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)1（3）所述的培養(yǎng)基由以下原料制成：玉米胚粕和玉米淀粉黃漿糖化液100g(DE值大于90)，加入蛋白胨2.5~2.7g、酵母粉2.2~2.5g、L-cys0.4~0.6 g、MgSO₄ 0.125~0.135 g、肌醇0.0375~0.045g、KCl 1.74~1.86g、蒸餾水250ml，制成培養(yǎng)基，pH自然，滅菌。

3.如權(quán)利要求1(5)所述反膠團(tuán)萃取其特征為：利用7mmol/L Aliquat 366溶于有機(jī)溶劑正庚醇制成反膠束對(duì)谷胱甘肽進(jìn)行反膠團(tuán)萃取，萃取條件：發(fā)酵液pH=2.5，反膠束與發(fā)酵液體積比為2:1，K⁺濃度0.08～0.1mol/L，萃取時(shí)間12～15min得到萃取液；利用NaCl溶液對(duì)谷胱甘肽進(jìn)行反萃取，反萃取條件：采用1.0-1.2 mol/L的NaCl水相進(jìn)行反萃取，控制溫度為20℃，調(diào)節(jié)pH值為5.6~5.9得到反萃取液，利用納濾設(shè)備將反萃取液中的鹽離子脫去，再進(jìn)行真空冷凍干燥，制得谷胱甘肽成品。