[發明專利]一種成纖維細胞培養方法

在審

• 申請號: 202010039292.5
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111117948A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 楊一凡;劉丹;吳疆;王保如
• 申請（專利權）人: 安徽瑞達健康產業有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K8/99;A61Q19/08
• 代理公司: 合肥方舟知識產權代理事務所(普通合伙) 34158
• 代理人: 劉躍

本發明公開一種成纖維細胞培養方法及其培養基,及由此方法獲得成纖維細胞。本申請采用含有干細胞培養基的培養上清和生長培養基共同培養的方法培養成纖維細胞，不僅提高成纖維細胞的活性，促進成纖維細胞分泌膠原蛋白，而且縮短了成纖維細胞抗衰除皺時間，對于迫切需求改善的治療者縮短了等待時間，降低了治療的經濟成本和時間成本。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞培養基及其應用，更具體涉及一種成纖維細胞培養基及其培養方法及由此方法獲得成纖維細胞。

背景技術

成纖維細胞，也稱為纖維母細胞，是疏松結締組織的主要細胞成分，屬于終末分化細胞，這種細胞會制造膠原蛋白等蛋白質。成纖維細胞數目最多，胞體大，為多突的紡錘形或星形的扁平細胞，細胞核呈規則的卵圓形，細胞輪廓不清，具有突起。其形態尚可依細胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發生改變。

成纖維細胞胞體較大，胞質弱嗜堿性，胞核較大呈橢圓形，染色質疏松著色淺，核仁明顯。電鏡下，其胞質可見豐富的粗面內質網、游離核糖體和發達的高爾基復合體，表明它具有合成和分泌蛋白質的功能。成纖維細胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質。它合成的前膠原蛋白分子經內切酶作用，聚合和重排，可形成與成骨細胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm周期橫紋的膠原原纖維，膠原原纖維經互相粘合形成膠原纖維。經檢測，這兩種細胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維，在形態和生化結構上完全相同。處于成熟期或稱靜止狀態的纖維細胞，胞體變小，呈長梭形，粗面內質網和高爾基復合體均不發達，被稱為纖維細胞。在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞，其功能活動也得以恢復，參與組織損傷后的修復。另外，在結締組織中，仍保留著少量具有分化潛能的間充質細胞，它們在創傷修復等情況下可增殖分化為成纖維細胞。

laViv自體成纖維細胞注射是美國Fibrocell公司開發的自體成纖維細胞移植美容技術，2011年6月22日獲美國食品藥品管理局(FDA)批準用于改善成人中重度鼻唇溝皺紋。laViv是一種個體化美學細胞療法，其專利技術是提取患者本人生成膠原的皮膚細胞--成纖維細胞并進行增殖。laViv需要連續注射3次，相鄰2次治療的間隔時間為3～6周。

其治療流程大致為：

(1)、從患者耳后取約3～4平方毫米的皮膚，分離出真皮內的成纖維細胞，送至廠商工廠(Fibrocell cGMP)；

(2)、在工廠內，將樣本纖維原細胞培養增殖大量新細胞，冷凍儲藏，供多次注射治療使用；

(3)、治療時，將培養增殖細胞注射入患者自體皮膚，從而達到增加局部纖維原細胞數量、促進膠原形成、促進自身再生修復過程的功效。

優勢：自體細胞和患者組織相容，成功解決了排斥問題，該細胞可以存活于體內，在注射后即刻及較長時間段內都具有對皺紋或皮膚凹陷的治療效果。沒有證據表明細胞在注射后會被機體吸收或損失，隨著時間的推移，除皺的效果更加顯著。

laViv自體成纖維細胞注射技術自1995年開始，已經在英國開展6000多個臨床病例，美國開展2000多個臨床病例，最長隨訪病例長達6年。患者滿意度高，除注射部位不良反應外，未出現嚴重不良反應。

不良反應：在臨床試驗中，最常見的不良反應是注射部位發紅、瘀傷、腫脹、疼痛、出血、水腫、結節、丘疹、刺激、皮炎和瘙癢。注射部位反應在嚴重程度上多數屬輕度至中度，并在1周內消退。

發明內容

為解決當前人體成纖維細胞在美容抗衰領域中存在的laviv細胞回輸見效慢，時間成本和經濟成本高，現提供一種細胞培養基及其應用、及成纖維細胞培養方法，不僅提高了成纖維細胞的活性，促進成纖維細胞分泌膠原蛋白，而且縮短了成纖維細胞抗衰除皺時間，對于迫切需求改善的治療者縮短了等待時間，降低了治療的經濟成本和時間成本。

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：