[發明專利]甲狀腺癌鑒別標志物

有效

• 申請號: 202010037595.3
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111197087B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 肖海鵬;彭穗;劉蕊;王深明;程磊;呂偉明;洪澍彬;何其曄
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫院;上海鹍遠生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長

1.一種用于甲狀腺結節良惡性鑒別的甲基化檢測的引物分子對，所述引物分子對如SEQ ID NO:1和2，或，SEQ ID NO:3和4所示。

2.一種用于甲狀腺結節良惡性鑒別的甲基化檢測的探針分子，所述探針分子如SEQ IDNO:7和8所示。

3.一種用于甲狀腺結節良惡性鑒別的甲基化檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權利要求1所述的引物分子對。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括如權利要求2所述的探針分子。

5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括檢測內參基因ACTB的引物，其中，檢測內參基因ACTB的引物能擴增出由SEQ ID NO:5和6作為引物擴增得到的ACTB基因的片段。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括如SEQ ID NO:9所示的檢測內參基因ACTB的探針分子。

7.如權利要求3-6中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR反應試劑和任選的檢測DNA甲基化的試劑。

8.檢測甲基化水平的試劑在制備甲狀腺結節良惡性鑒別試劑盒中的應用，其特征在于，所述試劑用于檢測樣品中（1）由SEQ ID NO:1和2作為引物擴增得到的LIMK1基因的片段的甲基化水平，和（2）由SEQ ID NO:3和4作為引物擴增得到的SLC17A5基因的片段的甲基化水平，所述鑒別包括根據所述甲基化水平判讀甲狀腺結節良惡性。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述試劑包括引物分子對，所述引物分子對能擴增出由SEQ ID NO:1和2作為引物擴增得到的LIMK1基因的片段或由SEQ ID NO:3和4作為引物擴增得到的SLC17A5基因的片段。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述引物分子對如權利要求1所述。

11.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述試劑還包括探針分子，所述探針分子能與以下片段雜交：由SEQ ID NO:1和2作為引物擴增得到的LIMK1基因的片段或由SEQ IDNO:3和4作為引物擴增得到的SLC17A5基因的片段。

12.如權利要求11所述的應用，其特征在于，所述探針分子如權利要求4所述。

13.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述樣品來自哺乳動物的組織、細胞或者體液。

14.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述樣品來自哺乳動物的甲狀腺組織或血液。

15.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述樣品來自哺乳動物的血漿。

16.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述DNA是全基因組DNA和/或cfDNA。

17.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述檢測包括：基于重亞硫酸鹽轉化的PCR、DNA測序、甲基化敏感的限制性內切酶分析法、熒光定量法、甲基化敏感性高分辨率熔解曲線法、基于芯片的甲基化圖譜分析、質譜。

18.如權利要求17所述的應用，其特征在于，所述檢測是熒光定量PCR檢測。

19.如權利要求8-12中任一項所述的應用，其特征在于，所述判讀方法為：根據兩個基因的甲基化水平計算得分，得分大于0則甲狀腺結節為惡性結節，其中，得分= 3.17 – 0.10×LIMK1甲基化水平– 0.31 ×SLC17A5甲基化水平。