[發明專利]一種酶法制備恩沙替尼中間體的方法

在審

• 申請號: 202010036605.1
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111118072A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 唐云平;肖延銘;張飛龍;嚴燕兵;葛文強;梁阿朋
• 申請（專利權）人: 長興制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明涉及醫藥技術領域，公開了一種酶法制備恩沙替尼中間體的方法，以2,6?二氯?3?氟苯基乙酮為底物，在羰基還原酶、輔因子及氫供體的存在下，發生不對稱還原反應生成(R)?2,6?二氯?3?氟苯基乙醇，所述羰基還原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明方法可以制備獲得高手性ee值(ee＞99％)的恩沙替尼中間體(R)?2,6?二氯?3?氟苯基乙醇，以替代傳統的化學合成方法，減少生產成本及對環境的污染。本發明提供的恩沙替尼中間體的合成方法，反應條件更溫和，反應速度更快，反應收率和手性ee值高，且生產成本低，適合工業擴大化生產。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，尤其涉及一種酶法制備恩沙替尼中間體的方法。

背景技術

恩沙替尼，是新一代間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑，商品名為貝美納。臨床結果顯示恩沙替尼在療效與進口藥物相比更有優勢，特別是顱內轉移的患者中有更高的應答率，而且安全性方面更優。另外，研究進一步生物標志物分析顯示，恩沙替尼具有針對廣泛的繼發性耐藥突變的活性，包括對第二代ALK酪氨酸激酶抑制劑(TKI)出現耐藥的突變，如C1156Y(ORR為71％)，F1174L/V(ORR為71％)、I1171T/S(ORR為50％)和G1202R(ORR為33％)。2例G1202R突變的患者經恩沙替尼治療達到了部分緩解，持續緩解時間分別為7.6個月和4.0個月，研究提示恩沙替尼對G1202R點突變具有潛在的抑制作用。

恩沙替尼的結構式：

通過對恩沙替尼的結構分析可知，(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇是合成恩沙替尼的重要原料。因此，開發有效制備光學純的(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的方法具有重要的應用前景。目前，(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇主要以化學合成法合成為主，但該方法需要使用價格昂貴的手性配體和金屬試劑，產品收率低，手性ee值不高，同時化學生產成本大且對環境不優化，不適于規模化生產。(S)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的生物制備，目前已見報道，手性ee值大于99％，轉化效率大于99％(US08852909)。但(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的生物制備方法目前尚未見報道。因此，開發生物制備光學純的(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇的方法具有重要意義。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種酶法制備恩沙替尼中間體的方法。本發明利用羰基還原酶催化法制備高手性ee值(ee＞99％)的恩沙替尼中間體(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇，可以大幅減少生產成本及對環境的污染。

一種酶法制備恩沙替尼中間體的方法，其特征在于，所述方法以2,6-二氯-3-氟苯基乙酮為底物，在羰基還原酶、輔因子及氫供體的存在下，發生不對稱還原反應生成(R)-2,6-二氯-3-氟苯基乙醇，所述羰基還原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

MGILDNKVALVTGAGSGIGLAVAHSYAKEGAKVIVSDIDEDHGNKAVEDIKAQGGEASFVKADTSNPEEVEALVKRTVEIYGRLDIACNNAGIGGEAALAGDYGLDSWRKVLSINLDGVFYGCKYELEQMEKNGGGVIVNMASIAGIVAAPLRSAYTSAKHAVVGLTKNIGAEYGQKNIRCNAVGPAYIETPLLESLTKEAKEALISKHPMGRLGKPEEVAELVLFLSSEKSSFMTGGYYLVDGGYTAV*。

進一步地，所述羰基還原酶的DNA序列如SEQ NO.1所示。

SEQ ID NO.1：