[發(fā)明專利]馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株及其在制備驢副傷寒滅活疫苗中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010036541.5
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111154678B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡哲;王曉鈞;郭巍;戚亭
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所（中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發(fā)明公開了馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株及其在制備驢副傷寒滅活疫苗中的應(yīng)用，屬于生物疫苗領(lǐng)域。本發(fā)明所述的馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株，命名為20180422.D.DE.X，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號為：CGMCC No.18342。本發(fā)明的馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株20180422.D.DE.X具有免疫原性好、培養(yǎng)特性好等優(yōu)點，將該馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株接種于沙門氏菌增菌液，培養(yǎng)后，用甲醛(終濃度0.2％)滅活后，制備成滅活疫苗。實驗證明，使用本發(fā)明制備得到的滅活疫苗免疫小鼠，能夠使小鼠免于強(qiáng)毒馬流產(chǎn)沙門氏菌的攻擊，且在驢體上免疫安全性良好。因此該疫苗具有安全、低劑量免疫等優(yōu)點，是首個驢用馬流產(chǎn)沙門氏菌滅活疫苗，可以用于預(yù)防由馬流產(chǎn)沙門氏菌引起的驢副傷寒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種馬流產(chǎn)沙門氏菌其在制備滅活疫苗中的應(yīng)用，特別涉及一株自行分離得到的馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株以及由該細(xì)菌株制備得到的驢副傷寒滅活疫苗。本發(fā)明屬于生物疫苗領(lǐng)域。

背景技術(shù)

驢副傷寒是由馬流產(chǎn)沙門氏菌(Salmonella abortus)引起的馬屬動物的一種傳染病。臨床特征是孕畜發(fā)生流產(chǎn)；公畜表現(xiàn)為睪丸炎、髻甲腫；幼駒主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫大、下痢，有時還見支氣管肺炎。馬流產(chǎn)沙門氏菌只對馬屬動物具有致病性，該菌屬于革蘭氏陰性菌，具有菌體抗原4、12，鞭毛第二相抗原H-enx。早在18世紀(jì)末19世紀(jì)初，歐美地區(qū)發(fā)生過大批馬流產(chǎn)的現(xiàn)象，20世紀(jì)70年代末，我國華北、西北、東北等養(yǎng)馬地區(qū)也陸續(xù)爆發(fā)馬流產(chǎn)沙門氏菌病，并造成了比較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，該病全年都可發(fā)生，但主要發(fā)生于春秋兩季，大多數(shù)表現(xiàn)為散發(fā)，有時呈地方流行性。

關(guān)于驢得馬流產(chǎn)沙門氏菌病(驢副傷寒)，我國很少報道，20世紀(jì)60年代，崔思烈曾報道由馬流產(chǎn)沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌引起孕驢的流產(chǎn)，以及驢駒的腹瀉和死亡，在分離的26株沙門氏菌中有19株鼠傷寒沙門氏菌和7株馬流產(chǎn)沙門氏菌，在4例病料中，均為兩種菌混合感染。2019年，H.Wang等報道在我國東海岸的流產(chǎn)驢群中分離到馬流產(chǎn)沙門氏菌。以往驢的馬流產(chǎn)沙門氏菌病的研究不被關(guān)注，國內(nèi)和國際的相關(guān)研究并不多見，也不深入，是一種被忽視的傳染病。近年來我國驢業(yè)市場發(fā)展迅速，各種驢肉、驢奶、阿膠等副產(chǎn)品供不應(yīng)求，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要，傳統(tǒng)的農(nóng)戶散養(yǎng)驢已經(jīng)逐步發(fā)展為集約化飼養(yǎng)的模式。驢本身是一種抗病能力很強(qiáng)的動物，所以人們普遍認(rèn)為“驢不得病”，但是集約化養(yǎng)殖驢只飼養(yǎng)密度大，有利于傳染病病原的傳播和擴(kuò)散，所以，集約化養(yǎng)殖的驢場面臨與雞場、豬場等飼養(yǎng)場同樣的傳染病流行的問題。很多驢場出現(xiàn)了一病病一群，一倒倒一地的情況，從2017年，我國華北、東北等地區(qū)驢出現(xiàn)了約30％的流產(chǎn)率，經(jīng)過哈爾濱獸醫(yī)研究所馬傳染病與慢病毒病創(chuàng)新團(tuán)隊對流產(chǎn)驢駒組織進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，所有流產(chǎn)組織分離菌株，經(jīng)鑒定后均為馬流產(chǎn)沙門氏菌，而未檢測到鼠傷寒沙門氏菌。馬流產(chǎn)沙門氏菌主要通過污染的水和食物以及交配進(jìn)行傳播，母驢流產(chǎn)時造成環(huán)境污染，難以根除，會持續(xù)在驢群中傳播。該病的發(fā)生直接影響了我國驢的存欄量、給養(yǎng)驢業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且該病還有蔓延的趨勢，對我國驢業(yè)持續(xù)發(fā)展產(chǎn)生了潛在的威脅和巨大的影響，嚴(yán)重阻礙了我國驢業(yè)的發(fā)展。

本發(fā)明的發(fā)明人在2018年在山東省聊城市某驢場流產(chǎn)驢駒的心臟組織中分離到一株馬流產(chǎn)沙門氏菌，經(jīng)實驗室鑒定為強(qiáng)毒株，命名為20180422.D.DE.X。利用20180422.D.DE.X株，開展了驢副傷寒滅活疫苗的研制開發(fā)工作，篩選培育出免疫原性良好的馬流產(chǎn)沙門氏菌強(qiáng)毒20180422.D.DE.X株，選擇了符合制造疫苗的滅活劑、佐劑及其他條件。對制品的生產(chǎn)工藝、安全性、保護(hù)率、免疫程序、最小劑量、抗體持續(xù)期和保存期等都進(jìn)行了試驗測定，并獲得了大量的試驗數(shù)據(jù)，實驗證明，使用本發(fā)明制備得到的滅活疫苗免疫小鼠，能夠使小鼠免于強(qiáng)毒馬流產(chǎn)沙門氏菌的攻擊，且在驢體上免疫安全性良好。因此該疫苗具有安全、低劑量免疫等優(yōu)點，是首個驢用馬流產(chǎn)沙門氏菌滅活疫苗，可以用于預(yù)防由馬流產(chǎn)沙門氏菌引起的驢副傷寒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種免疫原性良好、效價穩(wěn)定的馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株；

本發(fā)明的目的之二是提供所述的馬流產(chǎn)沙門氏菌驢源株在制備疫苗中的應(yīng)用；