[發(fā)明專(zhuān)利]波棱瓜子殼提取物的液相色譜檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010036029.0
• 申請(qǐng)日: 2020-01-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111208224B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪俊松;陳劍鋒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 南京理工大學(xué)專(zhuān)利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

本發(fā)明公開(kāi)了一種波棱瓜子殼提取物的液相色譜檢測(cè)方法。所述方法以波棱瓜子殼為原料，利用甲醇與水作為流動(dòng)相，通過(guò)在甲醇中添加0.1％的甲酸，調(diào)整不同洗脫時(shí)間下甲醇與水的比例獲得最佳洗脫條件，獲得液相圖譜。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高以及重現(xiàn)性好。通過(guò)本發(fā)明的檢測(cè)方法，充分地反映波棱瓜子殼中的化學(xué)成分信息。本發(fā)明建立的波棱瓜子殼提取物的液相分析譜圖對(duì)波棱瓜子殼的生產(chǎn)開(kāi)發(fā)具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種波棱瓜子殼提取物的液相色譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

波棱瓜(Herpetospermum pedunculosum)，是葫蘆科波棱瓜屬下的一個(gè)植物種。波棱瓜是攀緣性的草本植物，莖、枝都比較細(xì)長(zhǎng)，瓜外表長(zhǎng)有溝狀結(jié)構(gòu)。波棱瓜剛生長(zhǎng)出來(lái)的時(shí)候表面長(zhǎng)有稀疏的柔毛，最后表面變得十分光滑。波棱瓜是一年生植物，花為單性并且雌雄異株，廣泛分布于中國(guó)、尼泊爾和印度的喜馬拉雅山，常見(jiàn)于海拔2000-3500m的路邊和灌木叢中。

波棱瓜子，系葫蘆科植物波棱瓜的干燥成熟的種子，是中國(guó)的傳統(tǒng)藏藥，藏語(yǔ)為“Se-Ji-Mei-Duo”，已收載在《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中。波棱瓜子具有清熱解毒的功效，被廣泛用于治療“赤巴”炎癥(藏藥三大疾病之一)。波棱瓜的用藥歷史相當(dāng)悠遠(yuǎn)，主要應(yīng)用它入藥的是藏醫(yī)和蒙醫(yī)。《迪慶藏藥》及《中華本草》記載：“種子味苦，性寒，效銳；能清俯熱、膽熱；治赤巴人臟腑，肝、膽熱癥(肝炎、膽囊炎)，消化不良。”袁海龍等從波棱瓜子的乙醇提取物中分離得到波棱素(herpetin)(袁海龍,李仙義.波棱素化合物及其制法和其藥物組合物與用途:,CN 1305468C[P].2007)，張梅等從波棱瓜子的乙酸乙酯提取物中分離得到波棱酮、去氫雙松柏醇(Dehydrodiconiferyl alcohol)、波棱內(nèi)酯Ⅰ(Herpetolide A)、波棱內(nèi)酯Ⅱ(Herpetolide B)等具有藥用價(jià)值的活性化合物(ZHANG M,DENG Y,ZHANG H B,et al.Two new coumarins from Herpetospermum caudigerum[J].Cheminform,2010,39(32))。

根據(jù)《中國(guó)藏藥》和《西藏常用中草藥》記載，用作藏藥“波棱瓜子”的主要部分是波棱瓜的種子，但種皮、花等部位也能夠利用，并且效用和種子差不多。據(jù)調(diào)研，目前尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)波棱瓜子殼的入藥說(shuō)明，其化學(xué)成分、藥理毒性等研究尚未有人涉足。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，成熟的波棱瓜子經(jīng)過(guò)曬干脫殼后即送往下一步加工，波棱瓜的果殼則被丟棄，造成了巨大的浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種波棱瓜子殼提取物的液相色譜檢測(cè)方法。該方法以波棱瓜子殼為原料，利用天然產(chǎn)物化學(xué)手段，通過(guò)在有機(jī)相中添加一定比例的甲酸，使用高效液相色譜建立波棱瓜子殼的液相圖譜，為波棱瓜子殼的產(chǎn)業(yè)化利用過(guò)程建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案如下：

波棱瓜子殼提取物的液相色譜檢測(cè)方法，包括以下步驟：

步驟1，將波棱瓜子殼粉碎；將粉碎后的波棱瓜子殼用95％乙醇進(jìn)行加熱回流提取，獲得醇提物，將波棱瓜子殼醇提物使用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，對(duì)萃取液減壓旋蒸，獲得乙酸乙酯萃取物；

步驟2，將波棱瓜子殼乙酸乙酯提取物加入色譜級(jí)甲醇中混溶，超聲使其充分溶解后過(guò)微孔濾膜進(jìn)樣；

步驟3，使用高效液相色譜儀，C18色譜柱為分析柱，以添加0.1％甲酸的甲醇為A相，以水為B相，進(jìn)行梯度洗脫，設(shè)置洗脫程序洗脫60min，獲得波棱瓜子殼提取物的指紋圖譜。

優(yōu)選地，步驟1中，回流提取次數(shù)為3次以上，所述的每次回流提取時(shí)間為1～3小時(shí)，優(yōu)選為第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，第三次1小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟2中，所述的微孔濾膜的孔徑為0.5μm。