[發明專利]光譜樣品支持物上的樣品制備方法

有效

• 申請號: 202010035824.8
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111458198B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 亞歷山大·福斯格內
• 申請（專利權）人: 布魯克·道爾頓有限及兩合公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/25;G01N27/64
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 孫微;孫進華

本發明涉及一種在光譜樣品支持物上制備樣品的方法，包括以下步驟：(i)提供樣品支持物，該樣品支持物包括單個液體液滴(例如洗滌液或者營養液的液體液滴)的排列，每個液體液滴中都包裹有微生物沉積物，(ii)提供由吸收性材料制成的板，該吸收性材料例如包含棉纖維，(iii)將板垂直降低到樣品支持物上，以使微生物沉積物與板接觸，從而使液體液滴吸收到吸收性材料中，(iv)提起局部富含液滴液體的板使其離開樣品支持物，從而暴露出耗盡液體的微生物沉積物，以及(v)準備暴露的微生物沉積物以用于光譜測定，例如通過紅外光譜或MALDI飛行時間質譜進行的測定。

技術領域

本發明涉及一種在光譜樣品支持物上制備樣品的方法，其中(a)提供了一種樣品支持物，該樣品支持物包括單個液體液滴的排列，每個液體液滴中都包裹有微生物沉積物，(b)提供由吸收性材料制成的板，(c)將板和樣品支持物以使液滴液體被吸收到吸收性材料中的方式放在一起，(d)(垂直)提起局部富集液體的板，使其離開樣品支持物，從而暴露出耗盡液體的微生物沉積物，并且(e)準備暴露的微生物沉積物以用于光譜測定。

背景技術

在下文中，將參考特定方面來說明現有技術。但是，這不應理解為是一種限制。也可以在本介紹的相對狹窄的范圍之上和之外使用對現有技術已知的有用的進一步發展和修改，并且在閱讀以下公開內容之后，這些進一步發展和修改對于本領域的技術人員而言將是顯而易見的。

較早的實驗表明，懸浮在營養液液滴中的微生物在最多一小時的相對短的靜置時間(或“靜止時間”)之后，以微生物的沉積物的形式沉積在平坦的基底上。例如，通過使吸收性布與液滴接觸，可以將以一種“生物膜”沉積的微生物與殘留的液體和殘留的懸浮顆粒小心地分離。在該“脫水”之后，可以通過隨后的質譜測定可靠地確定微生物的種類，請參見國際申請WO?2018/099500?A1。該發現之所以令人驚訝是因為與預期相反，發現目的微生物的細胞沉積物在被抽出時并未與液體一起被除去。這一發現可以培養(或培育)用于促進生長的微生物，也可以在一個相同的基底(例如用于插入到質譜儀的離子源中的樣品支持板，或用于插入到紅外光譜儀的測定槽中的樣本載玻片)上進行分析測定的準備。

尚無法獲得針對平坦基底上液滴中該微生物行為的完整科學解釋，但可以認為樣品支持物表面與微生物細胞之間的物理相互作用，以及來自微生物細胞表面的生物化學和生物物理特性的粘附過程決定了在基底上的優選粘附或沉降。

在從WO?2018/099500?A1已知的現有技術的進一步發展中，申請EP?3376202?A1提出了一種具有凹痕或孔的掩模，其內表面與液滴的外圍區域接觸并通過毛細管力側向去除液滴。在此過程中，不接觸液滴的中心(大部分微生物沉積物位于其下方)，因為擔心與沉積物的直接接觸必定會導致微生物耗盡(“平板效應”)，因此，在隨后的分析測定中會導致相關的靈敏度損失。

如在EP?3?376?202?A1中所描述的，通過具有輪廓的掩模或通過將剛性板放置在圍繞液滴的垂直間隔件上來局部、非接觸地去除液體的缺點是液滴中的充足的殘余液體可能仍會殘留在基底上的沉積物上，從而干擾隨后對微生物沉積物的分析，因此可能需要采取進一步的純化措施。

因此，需要從覆蓋的液體液滴中充分完全地分離出單獨的微生物沉積物，同時確保在該分離過程中盡可能少的微生物沉積物材料與液體一起被除去。通過閱讀以下公開內容，本發明要實現的其他目的對于本領域技術人員而言是立即清楚的。

發明內容

本發明涉及一種在光譜樣品支持物上制備樣品的方法，包括以下步驟：(i)提供樣品支持物，該樣品支持物包括單個液體液滴的排列，每個液體液滴中都包裹有微生物沉積物，(ii)提供由吸收性材料制成的板，(iii)將板垂直降低到樣品支持物上，以使微生物沉積物與板接觸，從而使液體液滴吸收到吸收性材料中，(iv)提起局部富含液滴液體的板使其離開樣品支持物，從而暴露出耗盡液體的微生物沉積物，并且之后根據需要，使可能殘留在微生物的細胞沉積物上的任何殘留液體膜干燥，(v)準備暴露的微生物沉積物以用于光譜測定，例如隨后的紅外光譜測定或質譜測定。