[發明專利]利用高效液相色譜和液質聯用色譜鑒別金銀花和山銀花的方法

在審

• 申請號: 202010035797.4
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111198236A
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 張芳;張永清;鄭冰清;張龍霏;石鵬亮;于曉;徐文流;翁少全
• 申請（專利權）人: 山東中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 濟南克雷姆專利代理事務所(普通合伙) 37279
• 代理人: 楊婷

1.利用高效液相色譜和液質聯用色譜鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，當供試品為金銀花或山銀花中的一種或兩種時，通過高效液相色譜檢測供試品干燥品中斷馬錢子酸和綠原酸的重量百分比，并計算綠原酸與斷馬錢子酸重量百分比的比值；通過液質聯用色譜檢測供試品干燥品中川續斷皂苷乙的重量百分比；利用綠原酸與斷馬錢子酸重量百分比的比值和川續斷皂苷乙的重量百分比來鑒別金銀花中是否混入山銀花。

2.根據權利要求1所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，當供試品干燥品中綠原酸與斷馬錢子酸重量百分比的比值小于2，且川續斷皂苷乙的重量百分比為0時，判定為金銀花。

3.根據權利要求1或2所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，所述綠原酸與斷馬錢子酸的含量的檢測方法為：取對照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀，于210～360nm波長處測定峰面積，采用外標法或標準曲線法計算，得到供試品中綠原酸與斷馬錢子酸的重量百分比，然后計算兩者比值；所述川續斷皂苷乙的含量的檢測方法為：取對照品溶液與供試品溶液，注入液質聯用色譜儀，利用液相分離，質譜測定特征離子的面積，采用外標法或標準曲線法計算，得到供試品中川續斷皂苷乙的重量百分比。

4.根據權利要求3所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，

(1)所述高效液相色譜法的測定條件為：色譜柱C18，4.6mm×250mm，5μm；波長240-324nm；以乙腈為流動相A，以pH值為1.5～4的酸的水溶液為流動相B，采用梯度洗脫，其中流動相A 0～20min，體積百分比5％→15％；20～30min，體積百分比15％→28％；其余為流動相B；

(2)所述液質聯用色譜法的測定條件為：液相部分色譜柱：C18色譜柱，10mm×2.1mm，1.7μm；柱溫：45℃；流速：0.3mL/min；進樣體積：1μL；流動相：以0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸銨)溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，采用梯度洗脫，其中流動相A0～3min，體積百分比92％，3～5min，體積百分比92％→35％，5～8min，體積百分比35％→15％，8～10min，體積百分比15％；其余為流動相B；質譜離子源模式：電噴霧離子源；掃描模式：選擇離子檢測；電離電壓：3500V；霧化室溫度：200℃；鞘氣：高純氮氣，35L/min；輔助氣：高純氮氣，10L/min；離子傳輸管溫度：290℃；碰撞氣：高純氬氣；采用負離子采集川續斷皂苷乙，其質荷比母離子為1075.0，子離子為749.2，碰撞能量，40eV。

5.根據權利要求4所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，所述的酸為磷酸或甲酸或乙酸或磷酸鹽。

6.根據權利要求4所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，所述的波長為斷馬錢子酸檢測波長為240nm，綠原酸檢測波長為324nm。

7.根據權利要求3所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，

(1)所述綠原酸與斷馬錢子酸的含量的檢測方法中的供試品溶液的制備方法為：取供試品粉末0.05-0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入溶劑10-50mL，超聲處理15-60分鐘，搖勻，過濾，即得。

(2)所述川續斷皂苷乙的含量的檢測方法中的供試品溶液的制備方法為：取供試品，粉碎成細粉，取約0.1-0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入85％甲醇20-50mL，精密稱重，室溫下超聲提取15-60min，冷卻后，精密稱重，用85％甲醇補足重量，濾過，取續濾液用0.22μm濾膜過濾，即得。

8.根據權利要求7所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，所述超聲的功率為250W，頻率35kHz。

9.根據權利要求7所述的鑒別金銀花和山銀花的方法，其特征在于，所述溶劑為水或0-50％乙醇溶液或0-50％甲醇溶液或其混合物。