[發(fā)明專利]抗犬降鈣素原抗體及使用了該抗體的檢查用試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010035481.5
• 申請(qǐng)日: 2020-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN111471108A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 島田駿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 優(yōu)志旺電機(jī)株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K16/26
• 分類號(hào): C07K16/26;C12N15/13;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇

本發(fā)明的目的在于提供一種與在犬的血中以低濃度含有的犬降鈣素原具有高結(jié)合性的單克隆抗體，此外還提供一種用于使用該抗體簡(jiǎn)便、快速且高靈敏度地對(duì)犬降鈣素原進(jìn)行檢測(cè)的手段。本發(fā)明提供抗體或其功能性片段、以及使用了它們的犬降鈣素原的檢測(cè)或測(cè)定用試劑盒，所述抗體或其功能性片段是抗犬降鈣素原的單克隆抗體或其功能性片段，其與犬降鈣素原的26～47位的氨基酸序列(序列號(hào)1)或121～130位的氨基酸序列(序列號(hào)2)所含的至少一個(gè)表位結(jié)合。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種與犬降鈣素原(cPCT,procalcitonin)的特定表位結(jié)合的單克隆抗體或其功能性片段。另外，本發(fā)明還涉及對(duì)該抗體或其功能性片段的可變區(qū)進(jìn)行編碼的多核苷酸、用于犬降鈣素原測(cè)定的該抗體或其功能性片段的用途、以及犬降鈣素原測(cè)定用試劑盒及犬的敗血癥或全身性炎癥反應(yīng)綜合征的檢查用試劑盒。

背景技術(shù)

敗血癥在未治療情況下是從休克、彌散性血管內(nèi)凝血綜合征(DIC)、多器官衰竭等進(jìn)展到死亡的急性疾病。另外，除了敗血癥這樣的感染癥引起的全身性炎癥反應(yīng)以外，由外傷、燙傷、胰腺炎等也會(huì)引起類似的全身性炎癥反應(yīng)。由這種感染癥和非感染癥兩者的侵襲引起的全身性炎癥反應(yīng)被稱為全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)。這些疾病進(jìn)展迅速，因此為了治療其診斷要求有迅速性。

對(duì)于人而言，顯示血中的降鈣素原濃度能夠評(píng)價(jià)敗血癥、SIRS的重癥度的程度、預(yù)后(或者死亡風(fēng)險(xiǎn))(非專利文獻(xiàn)1)。實(shí)際上，美國(guó)FDA認(rèn)可，人血中降鈣素原是能夠預(yù)測(cè)敗血癥的重癥度的標(biāo)記物。

對(duì)于寵物或家畜而言，敗血癥和SIRS也是嚴(yán)重且處置需要緊急性的疾病。在犬等中，敗血癥和SIRS的進(jìn)展比人快，對(duì)迅速診斷的要求度也高。另外，現(xiàn)行的對(duì)犬的這些疾病的診斷基準(zhǔn)要求心跳、體溫等醫(yī)生的直接診斷，在基準(zhǔn)的明確化、診斷處理量的提高方面存在課題。因此，對(duì)于犬，也提出了與人同樣地測(cè)定降鈣素原作為敗血癥或SIRS的標(biāo)記物并判定敗血癥的重癥度的手段(非專利文獻(xiàn)2)。

另一方面，這些動(dòng)物大多在動(dòng)物醫(yī)院接受診視及治療，但與人相比一般機(jī)構(gòu)的規(guī)模較小，因此要求得到診斷用的信息的方法是簡(jiǎn)便的方法。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)

非特許文獻(xiàn)1：Harbarth S.et al.American Journal of Respiratory andCritical Care Medicine(2001),vol.164,p.396-402.

非特許文獻(xiàn)2：Troia R et al.BMC Veterinary Research(2018)14:111(URL：https://doi.org/10.1186/s12917-018-1427-y)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的課題

非專利文獻(xiàn)2中，通過(guò)ELISA對(duì)低濃度的犬的血中降鈣素原進(jìn)行定量。但是，所使用的抗體是多克隆抗體，由于與抗原的結(jié)合性低和抗體批次間的品質(zhì)偏差，可能發(fā)生測(cè)定靈敏度的惡化或偏差。

而且，犬血中的降鈣素原的濃度在健康時(shí)(40pg/mL左右)及患敗血癥時(shí)(100pg/mL左右)均較人的情況低幾分之一左右，健康時(shí)與患病時(shí)之間的濃度變化量也較小。因此，對(duì)于犬的敗血癥或SIRS的診斷，要求能夠以與人的情況相比更高的靈敏度來(lái)定量血中降鈣素原。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種與在犬的血中以低濃度含有的犬降鈣素原素具有高結(jié)合性的單克隆抗體、進(jìn)而提供使用該抗體、用于簡(jiǎn)便、迅速且高靈敏度地測(cè)定犬降鈣素原素的手段。

用于解決課題的手段

本發(fā)明者們反復(fù)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將具有犬降鈣素原所特有的氨基酸序列的N末端降鈣素原區(qū)域或抗鈣素原(katacalcin)區(qū)域作為抗原給予動(dòng)物，能夠得到與犬降鈣素原具有高結(jié)合性的單克隆抗體，從而完成了本發(fā)明。