[發明專利]一種熒光滴定檢測溫敏含糖無規聚合物與凝集素相互作用的方法

有效

• 申請號: 202010033525.0
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111157502B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 權靜;鄭永利;徐見容;趙蘭雪
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯

本發明涉及一種熒光滴定檢測溫敏含糖無規聚合物與凝集素相互作用的方法。該方法包括：測試激發波長下凝集素蛋白溶液的發射光譜；將凝集素蛋白溶液與溫敏含糖無規聚合物溶液混合后孵育，測試混合溶液的熒光強度和單獨凝集素FITC?PNA溶液的熒光強度；將獲得的最大熒光光譜強度變化與溫敏含糖無規聚合物濃度繪制曲線，并計算結合常數K_a。該方法成本低，測試分析快，操作方便簡單，測試性價比高，檢測靈敏度高。

技術領域

本發明屬于高分子聚合物和生物大分子相互作用的測定方法領域，特別涉及一種熒光滴定檢測溫敏含糖無規聚合物與凝集素相互作用的方法。

背景技術

糖，作為生物體內不可或缺的組成成分，是自然界中含量最大的生物分子和重要的信息分子，在生物演化中發揮著十分重要的作用，例如作為免疫應答、參與信號傳導、細胞-細胞粘附、能量儲存和代謝中間體、細胞分化、細胞生長及調控、和糖-蛋白的識別等。而糖的以上這些功能一般統稱為生物學功能，而上述這些生物學功能主要是通過糖與蛋白質的相互作用來得到實現的。另外，黃毅等人曾報道糖-蛋白質的相互作用是無數細胞識別過程的基礎，這些細胞識別過程除了上述的生物學功能之外，還涉及病菌感染、增殖和受精等。總而言之，對糖-蛋白質之間相互作用的研究，有助于更好的理解許多生物學過程，包括免疫響應、信息傳遞等在內的多種過程，從而在生命科學中發揮著舉足輕重的作用。因此，探討含糖聚合物與蛋白質的相互作用非常必要。但依據目前糖生物學的研究前沿，糖類的分子識別過程以及識別機理并不完全清楚，因此迫切需要建立一種有效的科學研究方法來量化它們之間的相互作用過程以及識別機理，從而為推動糖生物學領域的發展做出微小貢獻。

含糖聚合物，是一種人工合成的側鏈上帶有糖基的電中性水溶性聚合物，即是一類新的合成高分子，將典型的單糖或者寡糖至于經典的碳碳鍵聚合物側鏈上而構成的一類聚合物。與天然聚合物相比，由于具有良好的生物相容性和生物降解性等優點而受到了眾多科學研究者的青睞，因為碳水化合物是天然生物系統中廣泛存在的生物分子。一方面，相比于單糖或二糖，不僅可以呈現出較高的選擇性用于碳水化合物-受體之間的相互作用，從而為生命系統中的細胞識別過程提供更多的理論指導。另一方面，含糖聚合物因具有優異的生物相容性，慢慢的被科學家作為一種載體，要么通過負載疏水性藥物阿霉素(DOX)或者紫杉醇(PTX)，要么通過負載凝集素蛋白，通過有效地抑制癌細胞的遷移速率，從而用于攻克乳腺癌或肝癌等各類疑難雜癥。

此外，含糖聚合物是聚合物側鏈上帶有糖基的一種人工合成的聚合物。根據低臨界溶解溫度(LCST)，可分為線性(TLCST)和非線性(TLCST)糖基聚合物。當溫度高于LCST值時，更多的親水性糖基暴露出來，凝集素的識別能力增強；反之，凝集素的識別能力不顯著。目前的研究手段都比較簡單，只能表征糖基聚合物與凝集素具有一定的特異性識別能力，但是糖類的分子識別過程并不十分清楚。因此，需要定量化研究葡萄糖功能化的無規聚合物與凝集素之間的識別十分有必要。例如孫衎等人的研究^[1-2](孫衎主要研究了雙親水的含糖溫敏共聚物(PDEGMA-b-POVAG)，由于其含有大量具有生物功能的糖基，因此可以識別特定的蛋白質ConA，采取的手段主要是通過熒光共聚焦顯微鏡來觀察被異硫氰酸(FITC)標記的ConA 與含糖聚合物膠束的特異性識別作用。結果顯示，當溫度高于LCST(低臨界溶解溫度)時，由于更多的糖基暴露出來，導致含糖聚合物與蛋白質Con A的識別能力增強；當溫度低于LCST 時，含糖聚合物與蛋白質Con A的識別能力減弱。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種熒光滴定檢測溫敏含糖無規聚合物與凝集素相互作用的方法，以填補現有技術的空白。

本發明提供一種熒光滴定檢測溫敏含糖無規聚合物與凝集素相互作用的方法，包括：

(1)將溫敏含糖無規聚合物溶于HEPES緩沖溶液，逐級稀釋，其中稀釋后的溫敏含糖無規聚合物溶液濃度為3.125μg/mL-200μg/mL；