[發(fā)明專利]一種布魯氏菌抗體凝膠檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010033058.1
• 申請(qǐng)日: 2020-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN111398578A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海波;廖南山;劉強(qiáng);陳瓊娣;林鋒;黃珍珍;范新志;吳杰;廖景麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 珠海朗泰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

本發(fā)明公開了一種布魯氏菌抗體凝膠檢測(cè)試劑盒，包括盒體，所述盒體內(nèi)設(shè)有內(nèi)置有檢測(cè)試劑卡的檢測(cè)試劑卡盒、布魯氏菌抗原試劑瓶、陽(yáng)性質(zhì)控試劑瓶、陰性質(zhì)控試劑瓶、稀釋液試劑瓶、倍比稀釋板，所述檢測(cè)試劑卡內(nèi)裝有微球凝膠和抗人球蛋白抗體AHG。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的布魯氏菌抗體凝膠試劑監(jiān)測(cè)盒中的抗人球蛋白微球凝膠法解決了SAT和RB法不能檢出不完全抗體的不足，同時(shí)又避免了Coombs法多次洗滌和離心的繁瑣，判讀結(jié)果客觀可標(biāo)準(zhǔn)化，不受操作者技能的影響，本發(fā)明布魯氏菌抗體凝膠試劑監(jiān)測(cè)盒可以在1個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)出待檢血清中是否存在布魯氏菌抗體，進(jìn)而判斷是否有布魯氏菌感染，這又是免疫捕捉凝集法所達(dá)不到的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及布魯氏菌病快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種布魯氏菌抗體凝膠檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

布魯氏菌病是一種人畜共患的傳染性疾病，在1860年由David Bruce最先確認(rèn)其發(fā)病原因，并以此命名。人們通過(guò)直接接觸牛、羊、豬和駱駝等患病動(dòng)物的血液、胎盤、胚胎或者子宮分泌物，或者人們食用帶有布魯氏菌病菌動(dòng)物的制品（特別是末經(jīng)高溫消毒的牛奶或者奶制品）而被感染布魯氏菌病。布魯氏菌病的發(fā)病區(qū)域主要集中在地中海、中東、阿拉伯半島、墨西哥、美國(guó)的中部和南部和南亞次大陸，布魯氏菌病會(huì)給發(fā)病區(qū)域造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)對(duì)公眾的健康也有嚴(yán)重的威脅。傷寒、單核白血球增多癥、利什曼原蟲癥和結(jié)核病這些病和布魯氏菌病的病癥相似，并且布魯氏菌病缺乏一些典型的癥狀，使得布魯氏菌病診斷困難。

在布魯氏菌病發(fā)病的進(jìn)程中，血清中有三類抗體，分別是IgM、IgA和IgG。在1967年Coghlan等人通過(guò)蔗糖密度梯度分離的方法，檢測(cè)一系列周期內(nèi)病人的血清，發(fā)現(xiàn)在布魯氏菌病急性期，血清里面有IgM和IgG完全抗體，在慢性期中，血清中主要是IgG不完全抗體。在1967年Kerrt等人確認(rèn)在布魯氏菌病慢性期內(nèi)，血清中還含有不完全抗體IgA。IgM抗體是完全抗體，IgM抗體很容易和抗原結(jié)合形成可見凝集物。IgA、IgG是不完全抗體，IgA和IgG不完全抗體與抗原結(jié)合不能形成可見的凝集物，但是加入抗人球蛋白抗體（AHG）后，就可以形成可見凝集塊。

診斷布魯氏菌病主要是檢測(cè)血清中的抗體，方法主要包括：虎紅平板（RB）凝集法、標(biāo)準(zhǔn)凝集試管（SAT）法、間接抗人球法（Indirect Coombs）以及免疫捕捉凝集（Immunocapture-agglutination）法。

虎紅平板凝集法的原理是：在PH=3.65的緩沖條件下，血清與被虎紅染色的布氏菌懸浮液混合在一起時(shí)，當(dāng)血清中有抗體時(shí)，便發(fā)生凝集反應(yīng)。這種方法簡(jiǎn)單并且快速，對(duì)于急性病的病人可以在5到10分鐘內(nèi)給出相當(dāng)好的結(jié)果。但是由于它只能檢出完全抗體，所以當(dāng)病人是布魯氏菌病的慢性期，虎紅平板凝集法會(huì)得出很高比例假陰性的結(jié)果，造成漏檢。

標(biāo)準(zhǔn)凝集試管（SAT）法是在試管中進(jìn)行的，在試管中按比例加入布氏菌懸浮液和倍比稀釋的血清，血清的稀釋比例為1：20到1：1280，然后在37℃水浴中孵育24小時(shí)，通過(guò)肉眼觀察試管底部的凝集。

但是對(duì)于患有慢性期布魯氏菌病、再次感染或者復(fù)發(fā)的病人來(lái)說(shuō)，RB和SAT方法就很難檢測(cè)出這些病人。在這些條件下，免疫反應(yīng)是由IgG不完全抗體占主導(dǎo)，不完全抗體限制了RB和SAT方法的敏感性，所以在血清檢測(cè)中使用這二種方法往往得到陰性結(jié)果。

Coombs法是在SAT法的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的，Coombs法可以用來(lái)檢測(cè)IgG不完全抗體，但是此方法需要多次手工離心和洗滌，并且結(jié)果判讀受檢測(cè)者主觀的影響，容易出現(xiàn)漏檢與誤檢。

免疫捕捉凝集（immunocapture-agglutination）法是在Coombs法基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的，該方法可以用來(lái)IgG和IgA不完全抗體，并且與Coombs法有相似的敏感性和特異性。這方法的優(yōu)點(diǎn)是容易操作，不需要洗滌和離心的步驟，缺點(diǎn)是該方法需要在24小時(shí)后得到結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容