[發(fā)明專利]細(xì)胞培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010029429.9
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111154709A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任浩;張智勇;楊逸禧;葉苗漫;黃龍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院(廣州重癥孕產(chǎn)婦救治中心;廣州柔濟(jì)醫(yī)院)
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N5/0775
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發(fā)明提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用，涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供的細(xì)胞培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基，及添加在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的細(xì)胞因子、激素、蛋白、生物胺、抑制劑和溶衰素。其中，基礎(chǔ)培養(yǎng)基可以在有效保持細(xì)胞環(huán)境穩(wěn)定的同時，保持細(xì)胞的活性。通過向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加細(xì)胞因子、激素、蛋白、生物胺、抑制劑和溶衰素，一方面通過各組分之間的協(xié)同作用，能夠代替?zhèn)鹘y(tǒng)培養(yǎng)基中的動物源成分，保證細(xì)胞培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，減少疾病傳播和免疫反應(yīng)的風(fēng)險。另一方面，上述各組分相互配合，能夠保持細(xì)胞活性，使細(xì)胞穩(wěn)定、快速地增殖，極大提高細(xì)胞的原代分離效率，改善細(xì)胞的自我更新能力和組織修復(fù)能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)基及制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

體外細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞生物學(xué)研究中的重要且常用技術(shù)，其變量包括培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基和補(bǔ)充物)、培養(yǎng)表面基質(zhì)、細(xì)胞接種密度和理化環(huán)境，以及傳代培養(yǎng)方案。其中，培養(yǎng)基可以說是最關(guān)鍵的因素。傳統(tǒng)培養(yǎng)基中添加胎牛血清(FBS)，存在感染和免疫反應(yīng)的潛在風(fēng)險。為了減少這些風(fēng)險，人們致力于開發(fā)人源補(bǔ)充劑，包括人血清和血小板裂解物。然而，使用人源補(bǔ)充劑是相當(dāng)有爭議的，主要是因為有限的來源和疾病在供者和患者之間傳播的可能性。此外，人源替代品成分不清、穩(wěn)定性差，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基特性不一致性，從而使細(xì)胞生產(chǎn)過程難以標(biāo)準(zhǔn)化。顯然，理想的情況是排除這些不明確的補(bǔ)充劑。

目前，市場上可以獲得一些商業(yè)化培養(yǎng)基，但這些商業(yè)化培養(yǎng)基的組分是保密的，所以不清楚它們的組分是否完全是明晰的。此外，這些商業(yè)化的無血清、無動物源成分的培養(yǎng)基由于性能不佳，在支持細(xì)胞尤其是干細(xì)胞的臨床培養(yǎng)方面表現(xiàn)一般。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種細(xì)胞培養(yǎng)基，以至少緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。

本發(fā)明的第二個目的在于提供上述細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法。

本發(fā)明的第三個目的在于提供上述細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明特采用如下技術(shù)方案：

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)基，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、細(xì)胞因子、激素、蛋白、生物胺、生物抑制劑和溶衰素。

根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，提供了上述的細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，包括：取配方量的各組分加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中并混合均勻，得到所述細(xì)胞培養(yǎng)基。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了上述的細(xì)胞培養(yǎng)基在培養(yǎng)細(xì)胞中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明提供的細(xì)胞培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基，及添加在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的細(xì)胞因子、激素、蛋白、生物胺、生物抑制劑和溶衰素。其中，基礎(chǔ)培養(yǎng)基可以在有效保持細(xì)胞環(huán)境的穩(wěn)定同時，保持細(xì)胞的活性。通過向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加細(xì)胞因子、激素、蛋白、生物胺、生物抑制劑和溶衰素，一方面通過各組分之間的協(xié)同作用，能夠代替?zhèn)鹘y(tǒng)培養(yǎng)基中的動物源成分，保證細(xì)胞培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，減少疾病傳播和免疫反應(yīng)的風(fēng)險。另一方面，上述各組分相互配合，不同的組分提供不同方面的營養(yǎng)和支持，培養(yǎng)基整體則提供了完善的營養(yǎng)以及充足的刺激和支持，促進(jìn)細(xì)胞的原代分離和增殖，提高活力、自我更新能力和組織修復(fù)能力。尤其是生物抑制劑可以抑制細(xì)胞衰老，提高原代分離效率、擴(kuò)增效率、活力和自我更新能力，溶衰素可以清除細(xì)胞群體中的衰老細(xì)胞從而阻止其引起細(xì)胞群整體的衰老和功能障礙，保持細(xì)胞群整體的活力和干性。

應(yīng)用本發(fā)明提供的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，能夠保證細(xì)胞的高效增殖，短期內(nèi)即可大量擴(kuò)增高純度的細(xì)胞，對于臨床應(yīng)用或基礎(chǔ)研究均有重要貢獻(xiàn)。

本發(fā)明提供的上述細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，工藝簡單、操作方便，只要取各組分混合均勻，即可得到細(xì)胞培養(yǎng)基。該制備方法無需借助昂貴的儀器，能夠有效節(jié)約成本，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。