[發明專利]一次性檢測肺癌多重基因突變的組合物及其應用

有效

• 申請號: 202010029160.4
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111235272B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 江風閣;黃蛤目;李碩卿;黃珊璐;陳曦;王香玲;宋慶濤;鄭立謀
• 申請（專利權）人: 廈門艾德生物醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

1.一種用于檢測肺癌多重基因突變的組合物，其特征在于，該組合物由下表所示的281條序列的引物和探針組成，且該281條序列用兩支PCR?8聯管分組分裝如下：

。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的引物和探針的反應體系，包括：

(1)逆轉錄反應體系：純化水5～25μL、5×逆轉錄緩沖液5～15μL、各引物20～150μmol、逆轉錄酶100～200U，總體積為20～30μL；

(2)PCR反應體系：純化水15～45μL、10×PCR緩沖液5～15μL、MgCl₂?1～10mmol、各對引物1～20pmol、各對探針1～20pmol、dNTPs10～100pmol、Taq酶1～10U，總體積為30～50μL。

3.一種試劑盒，包括權利要求1中所述的281條序列的引物和探針。

4.根據權利要求3所述的一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括兩種PCR?8聯管，該兩種PCR?8聯管分別檢測肺癌RNA基因融合和肺癌DNA基因突變。

5.根據權利要求3或4所述的一種試劑盒，其特征在于，所述PCR?8聯管中檢測肺癌RNA基因融合的檢測試劑包括：ALK、NTRK1、NTRK2和NTRK3融合基因檢測試劑各1管，ROS1融合基因檢測試劑2管，MET?14號外顯子跳躍基因突變檢測試劑1管，RET融合基因檢測試劑1管。

6.根據權利要求3或4所述的一種試劑盒，其特征在于，所述PCR?8聯管中檢測肺癌DNA基因突變的檢測試劑包括：EGFR、EGFR、EGFR、EGFR/BRAF、EGFR/KRAS、HER2/KRAS、HER2/KRAS突變基因檢測試劑各1管，外控檢測試劑1管。

7.權利要求3至6中任一權利要求所述的一種試劑盒的非診斷目的的使用方法，其特征在于，

包括：

(1)提取檢測樣本中的DNA和RNA，所述檢測樣本包括新鮮病理組織、石蠟包埋組織或石蠟切片組織；

(2)將所述RNA與逆轉錄酶混合，分別加入逆轉錄反應液，得到cDNA；

(3)將所述DNA和所述cDNA分別與混合酶混合，并加入到PCR?8聯管；

(4)經熒光PCR擴增儀擴增后，根據顯示的Ct值判斷檢測結果。