[發明專利]一種檢測空腸彎曲菌的引物組合和試劑盒

在審

• 申請號: 202010027760.7
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111020044A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 蔣原;楊捷琳;霍憶慧;隋國棟;徐之雯;趙麗娜;張潤和
• 申請（專利權）人: 上海海關動植物與食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明提供了一種檢測空腸彎曲菌的引物組合和試劑盒，屬于生物檢測技術領域，包括外部引物和內部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述內部引物包括上游內部引物和下游內部引物，所述上游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。采用本發明提供的引物組合對空腸彎曲菌具有高度的特異性，結合環介導等溫擴增方法能夠縮短檢測的時間，靈敏度達到20pg/μl。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種檢測空腸彎曲菌的引物組合和試劑盒。

背景技術

目前在實驗室多采用細菌培養和核酸檢測作為主要的空腸彎曲菌檢測方法。細菌培養法費時費力；普通PCR雖靈敏度高于細菌培養法，但檢測樣本易污染；熒光定量PCR法雖可實現對微量病原核酸樣本精準實時檢測，但需昂貴的實驗設備和經驗豐富的實驗人員，很難滿足快速檢測的要求。因此，對空腸彎曲菌的快速、準確地檢測具有非常重要的意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種檢測空腸彎曲菌的引物組合和試劑盒，采用本發明提供的引物組合對空腸彎曲菌具有高度的特異性，結合環介導等溫擴增方法能夠縮短檢測的時間。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種檢測空腸彎曲菌的引物組合，包括外部引物和內部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述內部引物包括上游內部引物和下游內部引物，所述上游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

本發明還提供了一種試劑盒，包括上述技術方案所述的引物組合、、核酸擴增反應酶、核酸擴增緩沖液和擴增顯色劑。

優選的，所述核酸擴增反應酶包括Bst DNA聚合酶。

優選的，所述Bst DNA聚合酶的酶活為5U～15U。

優選的，所述核酸擴增緩沖液包括20mM Tris-HCl、10mM(NH₄)₂SO₄、50mM KCl、24mMMgSO₄、0.1％Tween 20、1mM dNTP，所述核酸擴增緩沖液的pH值為8.8。

優選的，所述擴增顯色劑包括SYBR Green I。

本發明提供了一種檢測空腸彎曲菌的引物組合，包括外部引物和內部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述內部引物包括上游內部引物和下游內部引物，所述上游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游內部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。采用本發明提供的引物組合對空腸彎曲菌具有高度的特異性，結合環介導等溫擴增方法能夠縮短檢測的時間，靈敏度達到20pg/μl。

附圖說明

圖1為核酸樣本用四條引物進行反應結果；

圖2為核酸樣本稀釋后的反應結果。

具體實施方式