[發(fā)明專利]使用MES和MOPS作為流動(dòng)相改性劑從多峰樹脂洗脫生物分子

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010027060.8
• 申請(qǐng)日: 2013-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN111172135A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·戈達(dá)瓦特;D·卡明斯;V·瓦里庫(kù)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 建新公司
• 主分類號(hào): C12N9/40
• 分類號(hào): C12N9/40
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 史悅

本發(fā)明涉及使用MES和MOPS作為流動(dòng)相改性劑從多峰樹脂洗脫生物分子，具體為使用多峰樹脂和包含Good's緩沖液的洗脫緩沖液用于純化或富集生物分子的方法。

本發(fā)明申請(qǐng)是基于申請(qǐng)日為2013年10月23日，申請(qǐng)?zhí)枮?01380067814.0(國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2013/066319)、名稱為“使用MES和MOPS作為流動(dòng)相改性劑從多峰樹脂洗脫生物分子”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2012年10月24日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/717,880的優(yōu)先權(quán)，其通過提述以其整體并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用多峰(multimodal)樹脂和包含Good's緩沖液的洗脫緩沖液來(lái)純化或富集生物分子的方法。

背景技術(shù)

多峰樹脂(也稱混合模式樹脂)是包含至少兩種不同的基團(tuán)的層析介質(zhì)，其中所述基團(tuán)與靶分子通過至少兩種不同的機(jī)制相互作用。例如，多峰離子交換劑攜帶帶電基團(tuán)(例如，帶正電的氨基基團(tuán)、帶正電的季銨基基團(tuán)、帶負(fù)電的羧酸基團(tuán)、帶負(fù)電的磺酸基團(tuán))，所述帶電基團(tuán)可通過電荷-電荷相互作用與靶分子相互作用。這些多峰離子交換劑額外攜帶其他可與靶分子通過不同作用模式(如疏水相互作用、范德華相互作用、偶極相互作用、陽(yáng)離子-π相互作用或氫鍵)進(jìn)行相互作用的基團(tuán)。

EP 2 167 526 B1描述使用包含含有疏水部分和帶負(fù)電部分的配體的多峰樹脂純化凝血因子VIII。洗脫用包含高濃度的鹽(1.5M)、至少40％(w/v)的乙二醇、丙二醇或其組合和鈣離子的洗脫緩沖液實(shí)施。

US 2011/0160435 A1描述另一使用多峰樹脂純化凝血因子VIII的工藝。洗脫緩沖液包含至少一種在pH6至8帶正電的氨基酸。優(yōu)選地，所述氨基酸選自下組：賴氨酸、精氨酸和組氨酸，且所述氨基酸以高于0.4M，特別是高于0.5M的濃度使用。

US 2011/0166332A1描述用于從液體蛋白制備物通過將所述制備物與多峰陰離子交換劑接觸來(lái)分離至少一種非聚集蛋白的方法。實(shí)驗(yàn)部分描述使用在20mM Tris、20mMHepes、20mM MES、50mM NaCl中包含1M甘氨酸的洗脫緩沖液及pH9.0至pH4.5的線性梯度分離非聚集IgG。

發(fā)明內(nèi)容

在第一方面，本發(fā)明涉及用于純化或富集生物分子的方法，所述方法包括如下步驟：

(a)提供包含所述生物分子的水溶液；

(b)將所述水溶液與多峰樹脂接觸；

(c)任選地用水性洗滌緩沖液洗滌所述多峰樹脂；

(d)用水性緩沖溶液從所述多峰樹脂洗脫所述生物分子，其中所述水性緩沖溶液包含如下、基本上由如下組成或者由如下組成：至少15mM的Good's緩沖液；總濃度為0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸或纈氨酸中的一種或多種；總濃度為0-400mM的尿素、鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸檬酸鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、磷酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣和?；撬嶂械囊环N或多種；和0％-60％(v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物；并

(e)收集包含生物分子的級(jí)分，由此獲得純化或富集形式的生物分子。