[發(fā)明專利]基因轉(zhuǎn)運(yùn)體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010026644.3
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111154808B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張迪;王旗;李文雍;王榮;程小翠;李歡歡
• 申請（專利權(quán)）人: 阜陽師范大學(xué)
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

1.一種穩(wěn)轉(zhuǎn)小鼠胚胎細(xì)胞的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括如下步驟：將待轉(zhuǎn)小鼠胚胎細(xì)胞接種于添加有核酸/基因轉(zhuǎn)運(yùn)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)；

所述小鼠胚胎細(xì)胞為通過小鼠超排卵母細(xì)胞和體外受精獲得小鼠原核胚胎細(xì)胞；

所述核酸/基因轉(zhuǎn)運(yùn)體復(fù)合物包括基因轉(zhuǎn)運(yùn)體以及核酸，所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體和所述核酸通過靜電吸附作用結(jié)合；

所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體包括納米金粒子和聚乙烯亞胺，所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體為核殼結(jié)構(gòu)，其中，所述納米金粒子形成所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體的核心，所述聚乙烯亞胺包含有分子量為20000-30000的第一聚乙烯亞胺和分子量為1500-2000的第二聚乙烯亞胺，所述第一聚乙烯亞胺與所述第二聚乙烯亞胺交織包覆在所述核心的表面形成包覆外殼；所述第一聚乙烯亞胺和所述第二聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為1:1-3:2；

所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法包括：向所述聚乙烯亞胺的溶液中加入氯金酸溶液，攪拌，在攪拌時(shí)所述聚乙烯亞胺與納米金粒子自組裝形成具有所述核殼結(jié)構(gòu)的基因轉(zhuǎn)運(yùn)體；所述聚乙烯亞胺溶液所含聚乙烯亞胺的質(zhì)量百分含量和為0.01-1%，所述氯金酸溶液所含氯金酸的質(zhì)量百分含量為1-3%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)轉(zhuǎn)小鼠胚胎細(xì)胞的構(gòu)建方法，其特征在于，所述攪拌的溫度為22-27℃，所述攪拌的轉(zhuǎn)速為700-900rpm，所述攪拌的時(shí)間為45-50h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)轉(zhuǎn)小鼠胚胎細(xì)胞的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的核酸/基因轉(zhuǎn)運(yùn)體復(fù)合物的制備方法包括：將所述核酸的溶液和所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體的溶液混合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的穩(wěn)轉(zhuǎn)小鼠胚胎細(xì)胞的構(gòu)建方法，其特征在于，所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體的溶液所含所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體的濃度為400-600ng/μl，所述核酸的溶液所含核酸的濃度為400-500ng/μl，所述基因轉(zhuǎn)運(yùn)體與所述核酸的質(zhì)量比為（0.5-10）:1。