[發明專利]一種液質聯用測定血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及5-羧酸氯沙坦濃度的方法

在審

• 申請號: 202010026639.2
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111443135A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 高書林
• 申請（專利權）人: 蘇州國辰生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州吳韻知識產權代理事務所(普通合伙) 32364
• 代理人: 王銘陸

本發明提供了一種液質聯用測定血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5?羧酸氯沙坦濃度的方法，包括以下步驟：（1）血漿樣品預處理；（2）采用液相色譜?質譜聯用檢測；（3）標準曲線制備；（4）血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5?羧酸氯沙坦濃度的測定；本發明的方法快速、準確、靈敏度高、操作簡單服務于藥物的臨床應用。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，涉及體內藥物的分析測定方法，具體涉及一種液質聯用測定血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5-羧酸氯沙坦濃度的方法。

背景技術

氯沙坦鉀氫氯噻嗪片（Losartan Potassium and HydrochlorothiazideTablets）是含有氯沙坦和氫氯噻嗪的復方制劑，氯沙坦為血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，氫氯噻嗪為利尿劑，在治療高血壓的同時，用于：減少致命或非致命的心血管疾病、原發性中風和心肌梗死的風險；降低高血壓和左心室肥大患者的中風風險。目前尚未關于一個方法同時檢測氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5-羧酸氯沙坦的文獻報道。

發明內容

要解決的技術問題：針對上述問題，本發明提供了一種測定血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5-羧酸氯沙坦濃度的方法。

技術方案：一種液質聯用測定血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5-羧酸氯沙坦濃度的方法，包括以下步驟：

（1）血漿樣品預處理：

取血漿樣品，加入甲酸溶液酸化，加入內標混合溶液，加入乙酸乙酯萃取，高速離心，吸取上清液，氮氣吹干，加入ACN溶液，得到待測樣品；

（2）采用液相色譜-質譜聯用檢測：

①液相色譜測定，條件為：色譜柱：色譜柱 GL Sciences Inc.，InertSustain AQ-C18HP,3μm，2.1×100 mm；色譜柱溫：40℃；流動相A：含5mM乙酸銨、0.05%乙酸的水溶液；流動相B：100% ACN溶液；洗液：50%ACN溶液和100%ACN含0.1%的三氟乙酸；自動進樣器溫度為4℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進樣量為5uL，分析時間3.5min；

②質譜測定，條件為：離子源為電噴霧離子源，接口溫度：300℃，DL溫度：250℃，加熱氣流量：10.00 L/min，加熱塊溫度：400℃，干燥器流量：10.00 L/min；負離子方式檢測；掃描方式為多重反應監測；用于定量分析的離子反應分別為：m/z296.05→m/269.15，其為氫氯噻嗪；和m/z421.15→m/z157.25，其為氯沙坦；和m/z435.15→m/z157.15，其為5-羧酸氯沙坦；

（3）標準曲線制備：

用EDTA-K₂為抗凝劑的血漿將工作液稀釋20倍，取150uL的血漿樣品，再加入50.0uL的的氘代內標混合溶液，混合后加入600uL乙酸乙酯，渦旋混合10min，在4℃條件下2600 g離心10 min，取300μL上清液，于N₂下吹干，加入150μL 50%甲醇復溶，搖勻5 min，即得標準曲線樣品。采用上述中的色譜和質譜條件對不同濃度的標樣進行測定，繪制峰面積-濃度標準曲線，得到線性回歸方程：

氯沙坦：f(x)=2.09423*x-0.00370339，R2=0.9984388；

氫氯噻嗪：f(x)=1.88987*x-0.00216372，R2=0.9989974；

5-羧酸氯沙坦：f(x)=2.94750*x-0.00458261，R2=0.9993292；

（4）血漿中氫氯噻嗪、氯沙坦及其活性羥酸代謝產物5-羧酸氯沙坦濃度的測定：